Metodologia Allium Cepa Toxicidad

Materiales y métodos

DETERMINACIÓN DE EFECTOS GENOTÓXICOS EN CEBOLLA (Allium cepa)

Se seleccionarán bulbos de cebolla, se sumergirán por la parte apical en agua corriente durante 2 días con aireación constate con el fin de producir meristemos. El agua se cambiará diariamente y se mantendrá con aireación y temperatura controlada (21 °C). Este procedimiento se hará en ausencia de luz solar. Una vez que las raíces tuvieron una longitud de 3 a 5 cm se utilizarán para evaluar el efecto del herbicida.

Se utilizarán tres cebollas con sus respectivos testigos. El experimento se hará por triplicado.

Preparación de concentraciones

El producto que se utilizará es la presentación comercial ARRASA, que en etiqueta del producto indica una concentración de “ g/l”, en su presentación “…”. A partir del cual se prepararán soluciones acuosas en las concentraciones de 400 ppm, 200 ppm y 100 pmm, el mismo día del experimento.

Cada una de las concentraciones se hará por triplicado y se colocarán en vasos de precipitado, teniendo cuidado que los bulbos de la cebolla queden sostenidos y cuidado que los meristemos quede bañados por la solución.

Los meristemos testigos se colocarán en recipientes con agua destilada.

Los meristemos serán expuestos a las concentraciones mencionadas y los testigos estarán en oscuridad a temperatura de 21° C ± 2, por un tiempo de 4 horas, al terminó del tiempo se sacarán los bulbos y se lavará al chorro de agua para quitar el exceso de plaguicida.

Inmediatamente del lavado de los meristemos, los bulbos serán colocados en un baño de agua con oxigenación (baño de recuperación) y temperatura de 21° C ± 2. Un grupo de bulbos se retirarán del baño de recuperación a las 24 h. Y el resto permaneció en el baño durante 24 horas más.

Los bulbos retirados del baño de recuperación se enjuagarán al chorro de agua, se les quitará el exceso y se seleccionarán (sin necrosis) cinco meristemos tratados con las tres concentraciones del glifosato y los del testigo.

Los meristemos cortados (2 cm) se colocan en viales conteniendo Carnoy (3 partes de alcohol absoluto y 1 parte del ácido acético glacial), la fijación se hizo por un tiempo mínimo de 24 horas, a temperatura de refrigeración.

Tinción

Terminado el tiempo de fijación, los meristemos se transferirán con ayuda de un pincel a un vidrio de reloj y se pondrá el colorante aceto orceína, cuidando de que queden bien cubiertos, durante 20-30 minutos, durante este tiempo se calentará (4 o 5 veces) al fuego con una lámpara de alcohol, sin que el colorante hierva, se enfriará y se volverá a calentar.

Termiando el tiempo de tinción, los meristemos se pasaron a un portaobjetos limpio, se añade una gota de ácido acético y un cubreobjetos y se hará el aplastado hasta obtener una monocapa.

Observacion al microscopio

Las preparaciones se observarán al microscopio óptico (Marca Nikon, modelo Eclipse E600) con un objetivo de 40X, en cada una de ellas se contarán 200 células en campos al azar y se registrarán las células en interfase y las que entrarán en mitosis.

El cálculo del índice mitótico se hará de acuerdo con el esquema:

Índice mitótico : Número de células en mitosis x100

1000

El índice de los meristemos tratados con glifosato y de los testigos, se analizarán con prueba estadística t student.

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