Metodos De Analisis Para Carbohidratos

Métodos De Análisis De Carbohidratos

METODO FUNDAMENTO APLICACION PROCEDIMIENTO MATERIAL Y EQUIPO TAMAÑO CALCULOS

AZUCARES

REDUCTORES VINOS TINTOS O BLANCOS

JUGOS DE FRUTA Prepare una serie de diluciones a partir de la solución stock de glucosa. Las concentraciones deberán ser de 300, 150, 75 y 30 µg/ml. Utilice matraces volumétricos aforados con tapón y márquelos con la concentración correspondiente.

1. Pipetee 1 ml. de cada solución estándar de glucosa y agua destilada como blanco en tubos de ensayo con capacidad de 25 ml. aforados.

2. Añada 1 ml. de reactivo alcalino de Nelson.

3. Mezcle. Colóque los tubos en un baño de agua hirviendo durante 20 minutos y enfríelos al chorro de agua fría.

4. Añada 1 ml. de arsenomolibdato.

5. Mezcle bien por un períodode 5 min. (para disolver el Cu2O para reducir el aresnomolibdato).

6. Afore a 25 ml. con agua destilada y mezcle.

7. Lea la absorbancia a 520 nm.

Grafíque la absorbancia contra la concentración (µg/g). Utilice esta curva estándar para determinar la concentración de glucosa en las muestras de frutas.

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS PARA LA DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCORES TOTALES

1.- Extraiga el jugo de la fruta asignada mediante un extractor de jugos.

2.- Diluya el jugo de la muestra con agua destilada (1:49).

3.- Colóque 5 ml. del jugo diluido en un matraz volumétrico de 250 ml. y afore con agua destilada.

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES

1.- Transfiera 1 ml. del jugo diluido a un matraz volumétrico aforado de 100ml. y añada 5 ml. de reactivo de ferricianuro.

2.- Colóque los matraces en un baño de agua hirviendo por 10 minutos.

3.- Enfríe los matraces inmediatamente bajo el chorro de agua fría.

4.- Neutralice el contenido de los matraces con 10 ml. de solución de ácido sulfúrico 2N.

5.- Mezcle los contenidos de los matraces suavemente hasta que no emanen más gases.

6.- Añada 4 ml. de arsenomolibdato.

7.- Mezcle una vez más el contenido de los matraces.

8.- Afore a 100 ml. con agua destilada.

9.- Tome una celda del espectrofotómetro y transfiera ahí el contenido de cada matraz (uno por celda).

10.- Efectúe la lectura en el espectrofotómetro a 520 nm. El blanco constará de todos los reactivos antes mencionados, excepto la muestra de jugo de fruta bajo estudio. No olvide ajustar el espectrofotómetro con agua destilada al principio.

*Pipeta graduada

*Matraz Volumétrico Aflorado

*Tubos de ensayo

*espectrofotómetro *1ml Se calcula el valor k para la determinación de azúcares reductores totales mediante la siguiente fórmula:

k = c/a

En donde:

k = El factor por unidad de absorbancia o pendiente de la curva.

c = Concentración de azúcares reductores en gramos/100 ml.

a = Absorbancia de la solución a esa concentración.

Los valores k a diferentes concentraciones de azúcar se promedian y se designan como K. El contenido total de azúcares reductores, S, de la muestra se calcula de la fórmula:

S = K.A.D.

En donde:

S = Concentración total de azúcares reductores de la muestra en gramos/100 ml de jugo.

K = Pendiente promedio de la curva.

D = Factor de dilución.

GLUCOSA Para la construcción de la línea de calibrado deben prepararse cinco disolucionesde glucosa de concentraciones comprendidas entre

5×10-5M y 5×10-4M por dilución del patrón de glucosa. Añadir a la cubeta del espectrofotómetro 1 mL de reactivo Trinder y 250 µL de patrón, mezclar e incubar exactamente 5 minutos a temperatura ambiente. Medir a continuación la absorbancia de la mezcla de reacción a 505 nm frente a un blanco de reactivos. *Espectrofotómetro monohaz Spectronic 20 con cubetas de 1 cm de paso de luz

*4 matraces de 100 ml

*8 matraces de 50 ml

*1 vaso de 250 ml

* 2 vasos de 100 ml

*1 embudo, papel de filtro, vidrio de reloj.

*Cronómetro

*Reactivo Trinder 250ml

LACTOSA Determinar cálculos de lactosa presentes en la leche por el Método de FEHLING. *Leche Defecación de la muestra de leche

Colocar 10 mL de muestra en un matraz volumétrico de 100 mL con 25 mL de agua.

Añadir 6 mL de solución saturada de sub-acetato de plomo, 10 mL de solución acuosa saturada de sulfato de sodio y 1 mL de ácido acético glacial y mezclar. Dejar reposar media hora. Llevar al volumen con agua, filtrar. El filtrado colocarlo en una bureta.

Determinación de la lactosa

Proceder como en la titulación

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