Métodos Histologícos Y Microscópicos

nos permite observar cosas que a simple vista no se pueden observar. Un microscopio está compuesto por, un ocular que este capta y amplía la imagen formada en los objetivos, los objetivos que amplía la imagen, es un elemento vital que permite ver a través de los oculares, el condensador este lente concentra los rayos luminosos sobre la preparación, diafragma que regula la cantidad de luz que llega al condensador, foco dirige los rayos luminosos hacia el condensador , el tubo es la cámara oscura que porta el ocular y los objetivos este puede estar unida al brazo mediante una cremallera para permitir el enfoque, revólver es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos, y que rota para poder utilizar uno u otro, alineándolos con el ocular, tornillos macro y micrométrico son tornillos de enfoque, mueven la platina o el tubo hacia arriba y hacia abajo el macrométrico permite desplazamientos amplios para un enfoque inicial y el micrométrico desplazamiento muy corto, para el enfoque más preciso, platina es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera que permite mover la preparación, el brazo es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque asociados al tubo o a la platina la unión con la base puede ser articulada o fija, base o pie es la parte inferior del microscopio que permite que éste se mantenga de pie.

TIPOS DE MICROSCOPIA.

Entre los microscopios más utilizados o de mayor frecuencia se encuentra el microscopio de campo claro, de campo oscuro, microscopio de contraste de fase, de fluorescencia, de interferencia, confocal, microscopio electrónico, de transmisión y de barrido.

Microscopio confocal: este microscopio se utiliza para eliminar las imágenes desenfocadas, lo cual permite obtener una sección óptica de gran definición, el preparado es barrido horizontalmente por el delgado haz luminoso de un láser, mientras que la platina se mueve perpendicularmente al movimiento del haz, con desplazamientos discretos de gran precisión en relación con cada barrido en consecuencia gracias a este microscopio se obtienes imágenes bidimensionales con una nitidez excepcional y una mejor resolución.

Microscopio electrónico: o el preparado es barrido horizontalmente por el delgado haz luminoso de un láser, mientras que la platina se mueve perpendicularmente al movimiento del haz, con desplazamientos discretos de gran precisión en relación con cada barrido, en un microscopio electrónico la resolución es de 0,1 nm la muestra es iluminada por un haz de electrones y la focalización es llevada a cabo por electromagnetos en lugar de lentes.

Microscopio electrónico de transmisión: este requiere de muestras muy delgadas que son fijadas y deshidratadas, en él un haz de electrones precisamente enfocado proveniente de un cañón de electrones atraviesa un corte ultra delgado especialmente preparado de la muestra. El haz se enfoca sobre un área pequeña de la muestra mediante un condensador electromagnético, este microscopio tiene una alta resolución y es extremadamente útil para examinar capas distintas de una muestra.

Microscopio electrónico de barrido: en este un cañón de electrones produce un haz de electrones enfocado con precisión, denominado haz primario. Estos electrones atraviesan lentes electromagnéticas y son dirigidos sobre la superficie de la muestra, el haz primario de electrones elimina electrones de la superficie externa de la muestra, estos, emitidos en forma secundaria, son transmitidos hasta un lector, luego amplificados y utilizados para formar una imagen sobre una pantalla o sobre una placa fotográfica, la imagen se denomina microfotografía electrónica de barrido, son utilizados para visualizar características superficiales más que estructuras intracelulares.

Microscopio de fluorescencia: este microscopio aprovecha las ventajas de la fluorescencia esta se tiñe con colorantes fluorescentes llamados fluorocromos es usado más frecuentemente para visualizar muestras que son químicamente marcadas con un colorante fluorescente. La fuente de iluminación es una luz ultravioleta (UV) proveniente de una lámpara de mercurio o tungsteno; el ocular es equipado con un filtro que permite pasar las mayores longitudes de onda, mientras que las más cortas son bloqueadas o eliminadas. Las radiaciones ultravioletas son absorbidas por la marca fluorescente y la energía es reemitida en forma de una longitud de onda diferente que pertenece al rango de luz visible. Los colorantes fluorescentes absorben a longitudes de onda entre 230 y 350 nm. y emiten luz naranja, amarilla o verde sobre un fondo negro.

Microscopio de campo claro: contiene dos sistemas de lentes para magnificar la muestra: el ocular y el objetivo. La muestra es iluminada por un haz de luz enfocado sobre ella por una lente situada por debajo llamada condensador, y el resultado es que la muestra aparece oscura contra un fondo claro. La principal limitación de este sistema es la ausencia de contraste entre la muestra y el medio circundante, lo que dificulta la observación de células vivas.

Microscopio de campo oscuro: los haces de luz iluminan la muestra desde los costados. De esta manera la célula se ve brillante en un fondo negro. La principal ventaja es que nos permite ver células vivas sin teñir y analizar por ejemplo movimiento celular, este microscopio se utiliza para examinar microorganismos vivos que no son visibles con el microscopio común, que no pueden teñirse con los métodos estándares o que resultan tan distorsionados por la tinción que sus características no pueden identificarse.

Microscopio de contraste de fase: este es útil porque permite la observación detallada de estructuras internas en los microorganismos vivos en él la luz es transmitida a través de una muestra con un índice de refracción diferente del medio que la rodea, una porción de esta luz es refractada debido a leves variaciones en densidad y espesor de los componentes celulares. Las ópticas especiales convierten la diferencia entre la luz transmitida y los rayos refractados, resultando en una variación significativa en la intensidad de la luz y produciendo así una imagen discernible de la estructura en estudio.

METODOS HISTOLOGICOS

Se denomina métodos histológicos al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos, entre los cuales se encuentran los siguientes.

Toma de muestra: La calidad y la fidelidad con que una célula o un tejido muestren una imagen al microscopio, con las características morfológicas que poseían cuando estaban con vida, dependen esencialmente de la prontitud y el cuidado que se aplicó para obtener la muestra.

Existen diversos procedimientos que permiten obtener muestras de tejidos y órganos para conseguir preparaciones histológicas de buena calidad. Estos son:

 Mediante la biopsia: (del griego bios = vida y opsis = visión), consiste en la toma de un fragmento de tejido u órgano de un ser vivo. realiza a través de una operación quirúrgica hecha exprofesamente o durante la intervención quirúrgica efectuada en pacientes y corroborar así un diagnóstico de una determinada lesión.

La biopsia puede ser:

• incisional

• excisional

• por sacabocados

• por punción y absorción

• por raspado

• por trepanación

 La necropsia, las muestras se obtienen de seres muertos: En este caso es recomendable que los tejidos y órganos se obtengan inmediatamente después de producida la muerte.

Fijación: en este procedimiento tiene la finalidad que al aplicarlo es Detener la vida de las células e impedir las modificaciones post morten que pueda sufrir la célula (procesos autolíticos), manteniendo la estructura morfológica de células y tejidos sin que ocurran cambios notables en ellos Esto se consigue inmovilizando (por coagulación o precipitación) las moléculas proteínicas e inhibiendo principalmente las enzimáticas haciéndolas insolubles. Esta acción garantiza la integridad de las células y tejidos; se efectúa por mediante agentes químicos denominados fijadores. Los fijadores dentro de esta técnica se clasifican en dos grupos.

Los fijadores oxidantes que pueden ser, Oxidantes: el tetraóxido de osmio (ácido ósmico), el bicromato de potasio, ácido crómico, bicloruro de mercurio o “sublimado corrosivo”, ácido pícrico, ácido acético Y los reductores que suelen ser, el formaldehido, el glutaraldehído, el alcohol etílico, el alcohol metílico.

En la acción oxidante o reductora de los fijadores le confieren a las células ciertas condiciones que posibilitan una mejor aplicación de las sustancias colorantes, los fijadores suelen ser también:

Gaseosos: como el formaldehido.

Líquidos: como el ácido acético, al alcohol etílico, la acetona, etc.

Sólidos: como el bicloruro de mercurio, el bicromato de potasio, etc.

Un fijador es una sustancia fijadora para que ejerza de manera eficiente y adecuada sus funciones debe poseer las siguientes condiciones:

 Matar inmediatamente a las células, impidiendo

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