PRÁCTINA 08: SAPONINAS

PRÁCTICA N°08: TÉCNICA DE EXTRACCIÓN DE SAPONINAS (MÉTODO DEL MICROONDAS)

1. Fundamento

Las saponinas, generalmente son sustancias terciarias (C, H y O) de elevado peso molecular, neutras o ligeramente ácidas.

Consisten de un núcleo lipofílico (esteroide o triterpenoide), con una o más cadenas de carbohidratos. Al núcleo lipofílico se le denomina aglicón, por ser el grupo que está enlazado a un átomo de carbono anomérico, que es el átomo de carbono enlazado a dos oxígenos, o a un oxígeno y cualquier otro heteroátomo, como nitrógeno.

Según la estructura de la genina, sapogenina o grupo aglicón, se conocen dos tipos de saponinas: esteroides (neutras) y triterpenoides (ácidas).

Las saponinas presentan diversas actividades biológicas y farmacológicas: como la actividad hemolítica, tensoactiva, actividad antibacterial, actividad antifúngica, actividad antiinflamatoria, actividad biocida, actividad antitumoral, actividad expectorante, actividad diurética, actividad antiedematoso y actividad molusquicida.

Las microondas son radiaciones electromagnéticas no ionizantes, no causan cambios en la estructura molecular, pero producen movimientos, como la migración de iones o la rotación de dipolos de moléculas, que generan colisiones moleculares, dando como resultado que algunas sustancias se calienten. Si bien las microondas tienen frecuencias comprendidas entre 300 MHz a 300 GHz (lo que corresponde a longitudes de onda comprendidas entre 1 m y 1 mm), la frecuencia más usada a nivel industrial y dispositivos domésticos es de 2,45 G Hz.

La extracción asistida por microondas (MAE) utiliza la radiación de microondas como fuente de calentamiento de la muestra y del disolvente. Debido a los efectos particulares de las microondas sobre la materia (es decir rotación dipolar y la conductancia iónica), la calefacción con microondas es muy rápida y se produce en el seno de la muestra, dando lugar a extracciones muy rápidas.

1. Objetivos:

• Obtención de saponinas de una muestra vegetal.
• Determinar la concentración de saponinas en la muestra problema.

1. Materiales:

• 3 g de semillas de Chenopodium quinoa Willd
• Microondas
• Baño María con agitación
• Termómetro

• Balanza analítica
• Refrigeradora
• Espectrofotómetro
• 02  Vasos precipitados de 500mL
• Pipetas de 1mL, 2mL, 5 mL
• Tubos de ensayo

1. Procedimiento:

• Pesar 0.3 g del polvillo escarificado del pericarpio de la quinua.
• Colocar la muestra en un vaso precipitado y adicionar 25mL de agua destilada y 25mL de alcohol de 96°. También se colocará 2 vasos de 500 mL con agua destilada.
• Llevar la solución al microondas por un tiempo de 10 min.
• Cierre del equipo e inicio de la operación.
• Finalizado este tiempo se abre la puerta deteniendo así el funcionamiento del equipo, esperando que la solución se enfríe.
• Luego se procede al filtrado de la solución.

Curva espectral

La longitud de onda será de 528 nm.

Curva de calibración

• Se construirá utilizando como droga patrón saponinas de Quillaja Bark  purificadas tres veces por recristalización y secadas con vacío a 60ºC.
• La concentración de saponinas para preparar la solución patrón es de 0.4 mg%, disuelto en agua y alcohol 96° (50:50).
• A partir de la solución patrón concentrada se realizarán diluciones (0.2,0.1,0.05,0.025 mg%) utilizando agua destilada.
• La muestra problema también se diluye al 50%, 25% y 12.5% (se recomiendan hacer 3 repeticiones).
• Para cada una de ellas se medirá la absorbancia a 528 nm.
• Con el conjunto de datos y utilizando Excel se realizará la gráfica y se obtendrá por correlación lineal la ecuación que relaciona la concentración de saponinas con la absorbancia.

Cálculos:

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