Practica bioquimica. Determinación cuantitativa de urea
Enviado por arieel13 • 12 de Abril de 2020 • Apuntes • 340 Palabras (2 Páginas) • 340 Visitas
11/10/2016
Práctica 7. Determinación cuantitativa de urea.
- Objetivo:
Determinar la cantidad de urea presente en la muestra.
- Fundamento:
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco (NH4+) y anhídrido carbónico (CO2). Los iones amonio formados se incorporan al α-cetoglutarato por acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a NAD.
La disminución de la concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de urea de la muestra ensayada.
- Material:
- Tubos de ensayo
- Micropipeta 10-100µl
- Puntas de pipeta
- Gradilla
- Espectrofotómetro
- Cubetas
- Reactivos:
- R1 Tampón TRIS ph7.8
- R2 Enzimas (Ureasa))
- UREA CAL (patrón primario acuoso de urea)
- Muestra: sprintrol patológico
- Procedimiento:
- Se realiza el reactivo de trabajo: Disolviendo el contenido de un vial de R2 enzimas en un frasco de R1 de tampón. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
- En una gradilla colocamos 3 tubos de ensayo y los etiquetamos con: Blanco, Patrón Estándar y Muestra y añadimos a cada uno de ellos:
Blanco | Patrón | Muestra | |
RT(ml) | 1 | 1 | 1 |
Patrón(µl) | 10 | ||
Muestra(µl) | 10 |
- Medimos en el espectrofotómetro las absorbancias a 340nm de estos 3 tubos en 3 cubetas de plástico. Medimos a los 30sg y a los 90sg
- Calculamos : Variación de absorbancia: A1-A2.
- Lectura y resultados:
- Abs 30 segundos de patrón: 1.732
- Abs 90 segundos de patrón: 1.7
- Abs 30 segundos de muestra: 1.75
- Abs 90 segundos de muestra: 1.71
[[(A1-A2) Muestra – (A1-A2) Blanco]/[(A1-A2) Patrón – (A1-A2) Blanco]] x 50 = mg/dL de urea en la muestra.
Se obtiene una concentración de 69.5mg/dL
Una vez que sabemos la concetración, se compara con los valores de referenciadel spintrol patológico: 112-152mg/dl. Al compararlos se observa que el valor que nos da a nosotros es muy inferior al que tenía que dar. Podemos concluir un error a la hora de pipetear o en fotocolorímetro.
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