Preparacion Y Esterilizacion De Materiales

INTRODUCCION

En todo laboratorio de Microbiología es necesario que el área de trabajo así como los materiales a utilizar durante las prácticas, estén debidamente esterilizados y/o desinfectados; siendo ésta, una medida preventiva para proteger la salud y la seguridad de quienes están en contacto directo con cualquier tipo de agente biológico, físico o químico; definiéndose esterilidad, como la condición en la cual hay ausencia de cualquier microorganismo. Los métodos de esterilización más comunes son: calor seco (estufas de aire seco), calor húmedo (autoclave), flameado (mecheros) y algunas soluciones químicas (hipocloritos, yodoformos, peróxidos, amonios, fenoles y formaldehidos).

Este se procedimiento se debe realizar antes y después de la práctica para evitar cualquier riesgo de contaminación ya sea de los materiales, de los cultivos o de las personas que se encuentran dentro del laboratorio. De no hacerlo, podría afectar los resultados de la práctica o la salud y seguridad de quienes la realizan.

OBJETIVOS

• Reconocer los métodos, materiales y dispositivos, usados para la esterilización de cualquier elemento en el laboratorio de microbiología, así como su debido uso y manipulación.

• Preparar los materiales o elementos requeridos para luego ser llevados al autoclave u horno (dispositivos más comunes y útiles para la esterilización).

• Distinguir adecuadamente las propiedades de los materiales para así, realizar el debido proceso de esterilización.

• Aprender a desinfectar el área de trabajo y adquirir el hábito de hacerlo antes y después de cada practica.

• Diferenciar las propiedades básicas de él autoclave y horno, tales como temperatura, tiempo y presión (siendo esta última solamente del autoclave).

• Conocer los diferentes métodos de esterilización y los desinfectantes más usados dependiendo del nivel que se requiera.

• Aprender utilizar adecuadamente los diferentes instrumentos del laboratorio, para así lograr una adecuada esterilización.

METODOLOGIA

Para la realización de la práctica se requirió el uso de los siguientes materiales:

• Materiales a esterilizar:

o 5 cajas de petri

o 1 pipeta

o 1 balón aforado

o 1 pipeteador

• Materiales para esterilizar:

o Papel kraft

o Cinta indicadora o cinta de enmascarar

o Autoclave

o Estufa

PREPARACIÓN DE LOS MATERIALES A ESTERILIZAR:

Para realizar la esterilización, primero se deben recubrir los materiales con papel Kraft, asegurándolos con cinta indicadora o en su defecto con cinta de enmascarar. Luego de esto se pasa a utilizar el método que más convenga de acuerdo al tipo de material que se vaya a utilizar.

Autoclave (calor húmedo): Verificar que está apagada, retirar la olla que se encuentra al interior del autoclave. Llenar el tanque de agua hasta el nivel indicado ( 2 pulgadas). Colocar los materiales previamente recubiertos dentro de la olla e introducir esta en el autoclave. Después se ha de poner la tapa, asegurándose de que el tubo flexible de la tapa coincida con el compartimento, y mirar que la flecha de la tapa coincida con la señal al exterior del autoclave. Ahora se deben ajustar los pernos de la tapa, asegurándose uno a uno y siempre que se cierre uno, se ajusta el opuesto. Ajustar el termostato al máximo y encender la autoclave, ahora, se debe esperar unos 15 minutos hasta que se llegue a unas 15 psi y a 121 °C. Cuando se llegue a esto se debe apagar el autoclave y abrir la válvula de control, hasta que se libere totalmente el vapor del interior y se enfríe, para así abrir los pernos, sacar la tapa y sacar los materiales ya esterilizados, sin quitar el papel kraft hasta que se vayan a usar, ya que si se hace eso antes, se contaminaran los materiales. A la hora de usarlos es importante tener en cuenta que se debe tener prendido un mechero muy cerca del lugar de trabajo , para así asegurar que no se contaminen los materiales.

Fig.1 Autoclave antes de introducir los materiales

Estufa (calor seco): Para hacer la esterilización de materiales en la estufa, primero se ha de asegurar que esté apagada y fría, para así introducir los materiales a esterilizar, previamente recubiertos con papel Kraft, así, se cierra la puerta de la estufa y se enciende, dejando los materiales por dos horas a unos 160° C, pasado este tiempo se apaga la estufa y se espera a que se enfríe, de igual manera como en el proceso anterior, se sacan los materiales sin quitar el papel kraft hasta su uso.

Fig.2 Estufa antes de introducir los materiales

RESULTADOS

A partir de la práctica de laboratorio se obtuvieron las siguientes imágenes de los elementos a esterilizar:

Fig. 3-4 Cajas de petri, matraz aforado, pipeta y pipetiador despues de envolverlos en papel Kraft, y listos para realizar su esterilizacion.

De acuerdo a la información previa, el procedimiento que se realizo de manera abreviada fue el siguiente:

1. Se envolvieron las cajas de petri y pipeta con papel kraft, se llevaron a la estufa a 160° C durante dos horas, luego se apagó, se dejo enfriar una hora más y se procedió a sacarlos.

2. Se envolvió el pipeteador y balón aforado con papel kraft, se llevaron a la autoclave cubriéndolos con una toalla de papel a 15 lb de presión 121 ° C durante 15 minutos (hasta que alcanzo la presión requerida); y se procedió a sacarlos.

Se hace necesario mencionar que los elementos después de ser sacados fueron guardados para el próximo laboratorio, de esta manera, no se realizo la prueba de azul bromotimol sugerida en la guía.

DISCUSION

Mediante el autoclave se pueden esterilizar gran variedad de objetos y líquidos tales como medios de cultivo preparados, escobillones, gasas entre otros siempre que no contengan antibióticos ya que pueden perder actividad, proteínas que coagulen azucares, entre otros; en este caso se utiliza otro método de esterilización llamado filtración, en este proceso se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El tamaño del poro dependerá del uso al que se va a someter la muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros que se utilizan generalmente

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