Procesamiento de tejidos y microscopía

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

El tejido para ser visualizado al microscopio ha tenido que pasar por una serie de pasos, a esos pasos se denomina procesamiento de tejidos.

• ESPECÍMENES:

BIOPSIAS PEQUEÑAS: punch, shave, losange, core, endoscópicas.

BIOPSIAS MEDIANAS: exceresis, tumorectomías.

PIEZAS QUIRÚRGICAS GRANDES.

FLUIDOS CORPORALES.

• MACROSCOPÍA: A cargo del médico residente/ patólogo/ tecnólogo.
• PROCESAMIENTO DE TEJIDOS: T.M
• TINCIONES Y MONTAJE. T.M.; montaje se refiere a añadir la laminilla cubreobjeto sobre el portaobjeto.
• MICROSCOPÍA:  siempre responsabilidad del médico patólogo.

PASOS DEL PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

• FIJACIÓN: el tejido después de ser extraído del SV primero se le pone en formol para fijar.
• DESHIDRATACIÓN: a través de los alcoholes y sacar agua a ese tejido.
• ACLARAMIENTO E IMPREGNACIÓN: se pone un poco de parafina.
• INCLUSION EN PARAFINA
• FORMACION DEL BLOQUE: se forma el bloque de parafina con el tejido
• CORTES: pasa al microtomo para los cortes de 3 a 5 micras de grosor
• EXTENDIDO Y SECADO
• TINCIÓN Y MONTAJE

1. FIJACIÓN DE TEJIDOS: paso fundamental para el éxito de la lectura del tejido, se hace con el FORMOL, no se pone formol al 40% porque quema al tejido, lo que se hace es diluirlo para obtener formol al 10%, la relación por lo general es de 1 a 9 con el agua; los frascos tienen que tener boca ancha y tapa hermética eso nos garantiza que el vapor del formol no salga al exterior evitando irritación de las vías respiratorias que con el tiempo puede ocasionar sinusitis o cáncer de las vías respiratorias altas.
2. DESHIDRATACIÓN: es con alcoholes en forma creciente, se usa alcohol de menor a mayor concentración para sacar agua de un tejido, se usa procesadores automatizados de tejidos.
3. ACLARAMIENTO: se hace con xilol o con derivado del xileno, es sacarle la parafina al tejido.
4. INCLUSIÓN EN PARAFINA: se tiene un equipo que es la estación de inclusión en parafina. Hay 3 tipos de parafina: blanda (45 – 52 °C); semidura (53 – 58 °C); dura (59 – 65 °C).
5. FORMACIÓN DEL BLOQUE DE PARAFINA: el tejido con la parafina que lo cubre, la parafina nos permite que el tejido embebido en la parafina y solido para poder hacer los cortes.
6. CORTE EN MICRÓTOMO: se pone el bloque y vas sacando los micro cortes, los micro cortes tienen un espeso de 3 a 5 micrómetros inclusive hasta 7.
7. EXTENDIDO Y SECADO: las laminas de micro cortes tengo que sacarle el excedente de parafina eso se hace con un baño maría, se tiene una lámina se hace la pesa del tejido la adhiero a la lámina a una temperatura de 45°C que permite que la parafina se adhiera a la lámina porta objeto lo desparafino nuevamente con xilol y se vuelve a hidratar con un alcohol, pero ahora decreciente.
8. TINCIÓN Y MONTAJE: la tinción que se usa es H&E y el montaje se hace con entellan o bálsamo de Canadá y luego se pone el cubreobjeto para que selle el tejido; el objetivo del montaje es conservar la lámina por mucho más tiempo y realza la morfología del tejido de una forma más fina.

FIJADORES: hay de 2 tipos: químicas y físicas.

PRINCIPIOS BÁSICOS

• Los líquidos corporales en extendidos y las láminas de citología cervicovaginal requieren ser fijados con etanol o alcohol etílico a 96°. (todo lo que es líquido se fija con alcohol, lo que es sólido con formol)
• Los tejidos sólidos se fijan con formol para el procesamiento en parafina.
• Los tejidos sólidos de naturaleza ósea requieren primero ser fijados para después descalcificarse (sacarle el Ca a los huesos para que sea mas blando y pueda ser cortado por el microtomo)
• Los tejidos provenientes de biopsias intraoperatorias para secciones por congelación se procesan inmediatamente sin aditivos.
• Los tejidos para estudio de IF (inmunofluorescencia) que se cortarán por congelación (el criostato lo corta a -30°C porque a esa temperatura el tejido se torna duro y se puede cortar por el microtomo) requieren ser refrigerados con suero fisiológico a 2 a 8 °C si no se va a procesar de inmediato.

CUIDADO DE LOS TEJIDOS

• Tejidos grasos. Necesitan más tiempo con formol
• Piezas quirúrgicas óseas pequeñas que requieren descalcificar previa fijación con formol.
• Piezas quirúrgicas muy pequeñas.
• Fluidos corporales para block cell.
• Piezas quirúrgicas grandes: estómago, intestino, pulmón, riñón, útero. Tienen que ser preparados y luego fijados. Necesitan más tiempo de fijación, alrededor de 2 a 3 días. En cambio, las biopsias pequeñas como las endoscópicas basta con mantenerlas en formol al 10% por 1 o 2 horas.

DESCALCIFICACIÓN DE TEJIDOS

• El tejido óseo por su dureza requiere ser descalcificados para seguir su procesamiento y esté adecuado para los cortes.
• Existen soluciones descalcificantes suaves y fuertes.
• El ácido fórmico al 5-10% es una solución (suave) útil para descalcificar por ejemplo un cilindro óseo de médula mide 1,5 cm por 2 mm de ancho, se descalcifica 24 horas de una manera suave y lenta
• El ácido clorhídrico y nítrico (ácidos fuertes) al 10% se usan para descalcificar resecciones maxilares, diente, tumores óseos
• Adherido al hueso están músculos y grasa que debemos retirar y fijar aparte con formol para que con el ácido no se dañen.

Antes de descalcificar, la muestra tiene que estar fijadas en formol por lo menos 24 horas.

MICROSCOÍA ÓPTICA Y ELECTRÓNICA

MICROSCOPIO ÓTICO o microscopia de luz[pic 1]

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