Protocolo Medicion Azucares Reductores
Enviado por thadeux • 7 de Octubre de 2012 • 795 Palabras (4 Páginas) • 1.596 Visitas
Anexo 3. Determinación de la Concentración de Azúcares Reductores Totales (ART)
El método DNS o del ácido 3-5 dinitrosalicílico es un método colorimétrico, desarrollado para la cuantificación de azúcares reductores.
REACTIVO DNS
Mezclar y disolver en 250 ml de agua destilada 8 g de NaOH y 150 g de tartrato sodio potasio.
Se agregan 5 g de acido dinitrosalicílico.
Aforar a 500 mL con agua destilada.
Almacenar a temperatura ambiente y proteger de la luz.
PROCEDIMIENTO
Agregar 4 mL de reactivo a 2mL de muestra y 2 mL de agua destilada usando tubos tapa rosca.
Dejar en baño con agua en ebullición durante 5 minutos.
Detener la reacción en un baño de hielo.
Agregar 4 mL de agua destilada, y dejar reposando durante 15 minutos.
Leer densidad óptica a 540 nm contra un blanco obtenido en el procedimiento anterior pero agregando agua destilada en lugar de muestra.
CONSTRUCCIÓN DE LA CURVA ESTANDAR DE GLUCOSA
Se preparan las muestras de glucosa con concentraciones conocidas, se aplica el método DNS y se lee su absorbencia en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm.
Con los datos obtenidos se traza un grafico lineal de la concentración de glucosa (azúcar reductor) como una función de absorción, y así se determina la ecuación que relaciona las dos cantidades.
Anexo 4. Determinación de la concentración de Ácidos Grasos Volátiles (AGV), Alcalinidad Total (AT).
La determinación de los ácidos grasos volátiles se realizo por medio de una titulación, es un método a través del cual se determina el bicarbonato y los ácidos grasos volátiles en soluciones acuosas. La muestra es centrifugada o filtrada y se lleva a un pH de 3,0 con acido clorhídrico (HCL) 0,1N; a este pH. El bicarbonato será convertido en dióxido de carbono y los ácidos grasos volátiles estarán presentes en solución en la forma no ionizada. Después la muestra es sometida a calentamiento hasta ebullir con un sistema de condensación para remover el CO2 2, la solución restante se titula con hidróxido de sodio (NaOH) 0,1N hasta alcanzar un pH de 6,5. Los ácidos grasos volátiles (y quizás otros ácidos) serán convertidos ahora a su forma disociada.
Los equivalentes de bicarbonato y AGV se pueden calcular a partir de los volúmenes de acido y base utilizados en la titulación (Rojas 1988).
Las relaciones utilizadas son las siguientes.
Alcalinidad=(B*N_HCl*50.000)/V
En donde:
B= volumen de HCl usado para disminuir el pH en m L.
V= volumen de muestra tomada para el análisis en mL.
N_HCL= concentración de acido clorhídrico (Normalidad).
Las unidades de alcalinidad son (mg de Ca〖CO〗_3/litro).
ÁCIDOS GRASOS VOLÁTILES=D*N_NaOH*60.000/V
En donde
D= volumen de NaOH en mL requerido para elevar el pH después de haber usado HCL.
V= volumen de muestra tomada para el análisis en mL.
N_NaOH=concentración de hidróxido de sodio (normalidad).
Las unidades de Ácidos Grasos Volátiles son (mg de Ac. Acético/Litro).
Para
...