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PRACTICA CURVA TIPO DE AZUCARES REDUCTORES


Enviado por   •  27 de Septiembre de 2016  •  Prácticas o problemas  •  605 Palabras (3 Páginas)  •  2.944 Visitas

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  • Introducción[pic 3]

Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar como reductores con otras moléculas. Una curva tipo o curva de calibración es una representación gráfica  entre la relación de concentración (eje de las abscisas) y absorbancia (eje de las ordenadas).

Es necesario ensayar varias soluciones de concentración conocida y determinar sus respectivas absorbancias, construyéndose la curva tipo, cuya apariencia es una recta. Para medir la absorbancia se emplea un espectrofotómetro que realice lecturas a 540 nm.  

El método DNS (técnica de Miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5dinitrosalicilico para la hidrolisis de polisacáridos presentes en una muestra.

Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos en una reacción enzima generando un producto coloreado. La intensidad de color que se mide por métodos espectrofotométricos es proporcional a la concentración de azucares.

  • Objetivo
  • Obtener una curva de calibración para transformar las lecturas de absorbencia.
  • Obtener la actividad de la enzima invertasa.

.

  • Resultados

[pic 4]

Figura 1. Resultados Curva tipo azucares reductores

Tabla 1. Curva tipo de azucares reductores


Tubo No.

mL Glucosa 0.005M / Fructosa 0.0005M

Azúcar reductor (µmoles/2mL)

Blanco

0

0

1

0.1

1

2

0.2

2

3

0.4

4

4

0.8

8

5

1.0

10

Tabla 2. Valores de Glucosa + Fructosa en µmoles/2mL.

  • Cálculo de los µmoles/2mL

[pic 5]

[pic 6][pic 7]

[pic 8]

[pic 9]

Gráfica 1. Curva tipo de azucar reductor.

Discusión

Se llevó a cabo la preparación de tubos como se muestra en la tabla 1 se comenzó a observar la presencia de color cuando estos se sometían a calentamiento a baño maría, el color  va dependiendo de la cantidad de azúcar reductor (glucosa-fructuosa)  que se le haya colocado. La sacarosa es un disacarido no reductor, que no se oxida con facilidad debido a que sus átomos de carbono anomericos esta unidos a un enlace glicosidico. El ácido 3,5-dinitrosalisilico reacciona solo con azucares reductores, cuando la sacarosa se hidrolizo se libero Glucosa y Fructosa (ambos son azucares reductores) que reaccionarón con el 3,5 DNS a una temperatura dada durante un tiempo marcado para generar coloración y posteriormente ser observado en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm. Además de permitir el desarrollo de color (un tono amarillo representa una oxidación y un tono rojo cuando presenta una reducción) el DNS proporciona el nivel de pH necesario para que las recciones de óxido-reducción se lleven a cabo.

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