Práctica 7: Cinética Enzimática
Jhoana.12Síntesis3 de Mayo de 2023
2.978 Palabras (12 Páginas)82 Visitas
[pic 1] | INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA Departamento de Formación Básica Disciplinaria Academia de Bioquímica Médica I Segundo Semestre (23-2) | [pic 2] |
BIOQUÍMICA MÉDICA I
Práctica 7: Cinética Enzimática
Grupo: 2cm_13_
Equipo 3_
Integrantes: (En orden alfabético)
Nota: se deberán de reportar los 4 experimentos.
Profesor Titular: Barbosa Cabrera Reyna Elizabeth
Profesores de laboratorio: Álvarez Almazán Samuel
salvarezal@ipn.mx
Hernández Ramos Argentina
arghernandez@ipn.mx
Posadas Mondragón Araceli
aposadasm@ipn.mx
Fecha de entrega: miércoles 26/04/23
Lo gris se debe de quitar y completar con lo requerido
OBJETIVOS: Al finalizar el reporte de laboratorio el alumno/a deberá de ser capaz de:
Reconocer los principales factores que modifican la actividad enzimática: la temperatura, el pH y la concentración de enzima y de sustrato, así como la presencia de inhibidores.
Describir que información brinda la ecuación de Michaelis y Menten.
Diferenciar la temperatura óptima de activación de una enzima respecto a la temperatura de desnaturalización de una enzima.
Relacionar el pH de la solución donde se encuentra la enzima, con el grado de actividad de la misma. Diferenciar un registro cualitativo de uno cuantitativo.
Graficar la velocidad de la reacción en funcionamiento de la concentración de enzima (una recta con pendiente positiva).
OBJETIVO GENERAL
Objetivo de la práctica. Generalmente un objetivo es un solo enunciado que puede responder a las preguntas: ¿Qué?, ¿Cómo? Y ¿Para qué?
EXPERIMENTO 1. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Objetivo particular: Que va a determinar, medir, observar, comprobar, demostrar, u obtener, responde a las preguntas Qué y Para Qué, máximo 3 renglones) contestar
La reacción química que se representa es el fundamento de los 4 experimentos donde usamos ac. 3,5, dinitrosalicílico.
Reacción de azúcares reductores.
[pic 3] [pic 4][pic 5]
Maltosa Malturónico
+
[pic 6] [pic 7][pic 8]
Ac. 3,5 –Dinitrosalicílico Ac. 3 Amino-5-Nitrosalicílico
(Amarillo) (Rojo-Naranja)
El ác. 3,5, dinitrosalicílico en presencia de un monosacárido como la Maltosa reacciona formando Ác. 3 amino, 5 nitrosalicilico con transformación de Maltosa a ác. Malturónico. Al hacerlo, el ác. 3, 5 dinitrosalicílico que originalmente da un color amarillo cambia a un color rojo naranja o rojo caoba.
Descripción de resultados:
Nota: El tubo 1 será el testigo negativo
- Se agregaron los reactivos como se indica en la tabla siguiente:
Tabla 1
Tubos Solución | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
Sustrato almidón 8 mg/mL en Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL | --- | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Buffer de fosfatos 0.02M, pH = 7 mL | --- | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
Agua destilada mL | 5.5 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 |
Preincubar 5 minutos a | 25°C | 5°C | 25°C | 40°C | 50°C | 60°C | 90°C |
Posterior a este tiempo, agregar | |||||||
ácido 3,5 dinitrosalicílico mL | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Agregar la enzima (conservada en hielo) sin sacar los tubos de la incubación como sigue: | |||||||
Enzima (solución de amilasa) mL | — | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
Agitar todos los tubos y continuar la incubación por 15 minutos. | |||||||
Sacar los tubos de la incubación y cuidadosamente: | |||||||
Agregar ácido 3,5 dinitrosalicílico mL | ---- | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Colocar nuevamente todos los tubos en baño María ebullición durante 10 minutos | |||||||
Retirar y enfriar en baño de hielo. | |||||||
Leer en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco |
RESULTADOS En la siguiente tabla se muestran los resultados experimentales de los equipos 1
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA | ||
Tubo | Temperatura °C | Absorbancia nm Eq 1 |
1 | 25 | Blanco |
2 | 5 | 0.048 |
3 | 25 | 0.169 |
4 | 40 | 0.122 |
5 | 50 | 0.175 |
6 | 60 | 0.245 |
7 | 90 | 0.058 |
Nota: si no tienen los resultados de todos los equipos solo trabajar con los resultados que si cuenta.
Promedios:
Tubos | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
Temperatura | 25°C | 5°C | 25°C | 40°C | 50°C | 60°C | 90°C |
Absorbancia a 540 nm | blanco | 0.048 | 0.169 | 0.122 | 0.175 | 0.245 | 0.058 |
Con base a la siguiente curva tipo:
[pic 9]
Convertir la Densidad óptica (Absorbancia obtenida) PROMEDIO, en concentración molar de azucares reductores [AR],
Concentración de Azucares Reductores (AR) en mM
y=mx + b
AR = 5.6848 * DO
Ejemplo: para un tubo con absorbancia promedio de 0.015, el cálculo de AR es:
5.6848 * (0.015)= 0.0852
Temp. oC | Promedios [AR]…… |
5 | 0.2728 |
25 | 0.9607 |
40 | 0.6935 |
50 | 0.9948 |
60 | 1.3927 |
90 | 0.3297 |
Evidencias de aprendizaje
Trazar una gráfica en Excel de puntos de dispersión sin unir, donde la [AR] serán las ordenadas (y) y la Temperatura en las abscisas (x). No se incluye el tubo blanco o testigo. Deberá de incluir título de la gráfica (que es el título del experimento), y título y unidades de los ejes [AR /mM] vs Temp (oC), incluir la curva de línea de tendencia polinómica (deberá de verse como una campana).
...