Recuento de glóbulos blancos mediante la técnica de Neubauer

[pic 1]Recuento de glóbulos blancos mediante la   técnica de Neubauer

Alonso-Pérez Jhoanna Galilea1 , Aldaba-Muruato Liseth Rubi1 .

1.- Facultad de Estudios Profesiones Zona Huasteca, Universidad Autónoma de San Luis Potosí, Romualdo del Campo No. 501 Fracc. Rafael Curiel 79060, Ciudad Valles San Luis Potosí.

05 de abril 2022

Resumen

La primera línea de defensa del cuerpo humano es la estirpe linfoide, este pertenece a la serie blanca, al tener alteraciones en estos parámetros nos indica que hay una anormalidad que está causando dicho evento, es importante determinar cuáles son las causas que pueden provocar dichos daños, esta identificación es posible gracias al conteo de leucocitos por método manual.

La práctica presente tiene como objetivo realizar el recuento de glóbulos blancos en la cámara de Neubauer, con el propósito de verificar la salud optima del paciente, en alguna patología se puede presentar leucocitosis o leucopenia, así como también conocer la técnica a fondo para un buen diagnóstico.

Se utilizo sangre periférica para recuento de glóbulos blancos, una cámara de Neubauer y el líquido de Turk que facilito el conteo gracias a su poder hemolizador, se practicó el correcto llenado de la cámara de Neubauer por capilaridad.

Los resultados obtenidos por medio de la formula establecida fueron favorables ya que la paciente se encontraba dentro de los valores de referencia, aunque es posible que los resultados varíen de acuerdo con la edad y sexo de cada paciente, si estos valores no coinciden se tratara de alguna posible patología.

Palabras clave: Neubauer, Leucocitos, Cuantificación.

Introducción

En sangre humana podemos reconocer diferentes estirpes de células en este caso nos concentraremos en la serie linfoide. La principal función de los glóbulos blancos es defender al organismo contra agentes extraños como bacterias, virus, hongos y metazoarios, son parte importante del sistema inmunológico y cualquier alteración en el número de glóbulos blancos producidos podría desencadenar factores de riesgo para el humano. Los glóbulos blancos se podrían clasificar de dos formas, los primeros son los granulocitos que engloban los eosinófilos, neutrófilos y basófilos, y finalmente los agranulocitos que engloban los monocitos y linfocitos (Rivadeira-Dominguez, Galán-Zamora, & Zamora-Bello, 2020). Los linfocitos son células relativamente pequeñas tienen un diámetro de 7-10 ɥm, posee un núcleo grande que ocupa el 70% del espacio del citoplasma (Véliz & Guido, 2013). Los eritrocitos ejercen su función en sangre, en cambio, los leucocitos solamente utilizan la sangre como medio de transporte, pero realizan su función en otras áreas como la médula ósea, el endotelio y tejido (Rivadeira-Dominguez, Galán-Zamora, & Zamora-Bello, 2020).

El reactivo Turk contiene ácido acético que actúa hemolizando a los eritrocitos y solución acuosa de violeta de genciana que tiñe únicamente los leucocitos, las estructuras que no se tiñen son refrigerantes a la luz que también podría entenderse que son células vivas, en cambio las células que se tiñen de color azul no son refrigerantes a la luz y son células muertas (Gálvez , 2022). Los núcleos de los leucocitos se tiñen de una coloración azul violeta por acción del colorante. El número de leucocitos observados se recuenta en un volumen establecido y estas células observadas se calculan por cada microlitro de sangre (Gálvez , 2022).

La cámara de Neubauer puede ser conocido como hematímetro o hemocitómetro, se compone de vidrio grueso en forma de placa, y es menudo utilizado en el laboratorio. Se compone de tres superficies o espacios de forma rectangulares centrales, en una zona específica se encuentra la zona de recuento, se establecen una en cada lado de la cámara (Gálvez , 2022).

En esta técnica también se utiliza la pipeta de Thoma que está conformada por un material de vidrio grueso, esta esta especialmente diseñada para diluir muestras pequeñas de sangre, contiene un bulbo donde se encuentra una perla blanca que facilita la homogenización de la sangre con el diluyente (Gálvez , 2022).

Por lo tanto, el presente trabajo tiene como objetivo realizar el recuento de glóbulos blancos en la cámara de Neubauer, con el propósito de verificar la salud optima del paciente, en alguna patología se puede presentar leucocitosis o leucopenia, así como también conocer la técnica a fondo para un buen diagnóstico.

Materiales

Se hizo uso de los siguientes materiales:

El material biológico utilizado fue muestra de sangre en tubo EDTA tapa lila.

Material de venopunción, 1 cámara para el cuento Neubauer, cubreobjetos, pipeta de Thoma para glóbulos blancos con perla blanca, manguera y boquilla para la pipeta, microscopio óptico, tubos de ensayo 12x75, papel Parafilm, sanitas.

Reactivos químicos y soluciones

El reactivo Turk (hycel) este compuesto por lo siguiente:

1 mL en solución acuosa de violeta de genciana al 1%, 2 mL de ácido acético glacial, 100 mL de agua destilada.

Metodología

Primer paso preparación de la muestra con pipeta de Thoma

Se obtiene la muestra sanguínea mediante una venopunción con la muestra se almacena en tubo de tapa lila con EDTA, se aspira la muestra mediante una boquilla y la pipeta de Thoma hasta la marca 1 tratando en la medida posible que no se formen burbujas, limpiar la pipeta cuidadosamente sin hacer bajar la sangre.

El siguiente que se realizara es aspirar el diluyente Turk (hycel) no sobrepasando la marca once de la pipeta, se desmonta la manguera con mucho cuidado, y sellando la pipeta con papel Parafilm en cada extremo de la pipeta de Thoma, seguido de esto se tiene que homogenizar la muestra en un rotador automático o manual durante tres minutos desechando las tres primeras gotas de la muestra (Figura 1).

Segundo paso en cámara de Neubauer

Se utiliza un cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer, esta se llena de manera que se tiene que colocar la punta de la pipeta de Thoma en uno de los bordes de la cámara en algún espacio que quede entre el cubreobjetos y la cámara de Neubauer, tratando de que fluya por capilaridad o difusión de líquido, evitando la formación de burbujas o llenar en exceso.

Una vez llenada se deja reposar en una cámara húmeda durante diez minutos con propósito de que los leucocitos se sedimenten durante este tiempo.

Una vez que pasaron los diez minutos, se lleva la cámara para analizarse en el microscopio este se enfocara en el objetivo 10X tratando de localizar la cuadricula de la cámara de Neubauer, una vez enfocado y comprobando que la distribución de las células se encuentran distribuidas homogéneamente se procede a enfocar con el objetivo 40X, una vez enfocado se procede a realizar el recuento de los glóbulos blancos en forma de zigzag en los cuadrados grandes que ubican en las esquinas tratando de no contar células repetidas, una vez realizado el conteo se reportan los resultados.[pic 2][pic 3]

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