Tarea Abacard Estuardo Solares

ABACARD® P 30

PRUEBA PARA IDENTIFICACION FORENSE DE SEMEN

Inmuno ensaye para detección cualitativa de p 30, mca abacus diagnostics, inc.

Uso recomendado

La prueba abacard p 30 está diseñada para la detección cualitativa de p 30 en la identificación de semen. el p 30 es un marcador aceptado para la detección de semen en casos criminales incluyendo individuos vasectomizados o azzospermicos.

Sumario

En 1971, hara y otros describieron una enzima proteínica en el fluido seminal llamada gammaseminoproteina. en 1978, sensabaugh y otros, caracterizaron la proteina en detalle, fundamentando que su peso molecular corresponde a 30,000 dalton, y fue llamada p 30. en 1980, el primer ensaye inmunometrico fue desarrollado y, graves y sensabaugh, demostraron que el p 30 es un marcador forense confiable para la identificación de semen. el rango del p 30 es de 200,000 a 5,500,000 de nanogramos por mililitro de semen. la sensibilidad de la prueba abacard p 30 es de 4 ng/ml por lo que el fluido seminal diluido tiene una proporción de 1 en 1,000,000, siendo perceptible también. varios métodos de detección de p 30 incluida la doble difusión ouchterlony, electroforesis cruzada, elevada inmunoelectroforesis, inmunodifusión radial y elisa. una desventaja de los metodos mencionados es que son demasiado sensitivos o muy sofisticados y consumen mucho tiempo para su analisis en laboratorios forenses. sin embargo la prueba p 30 abacard de abacus diagnostics presenta resultados en solo 10 minutos.

Principios detrás de esta prueba

Para esta prueba el procedimiento es: 200 microlitros de una muestra se agregan al pozo “s” y se deja filtrar. Si el p 30 está presente en el espécimen este reaccionará con el móvil monoclonal antihumano p 30 y un anticuerpo complejo se forma. Este móvil anticuerpo-antígeno complejo emigra a través del dispositivo absorbente hacia el área de prueba “ t”. en el área de prueba “t” un monoclonal anticuerpo p 30 antihumano es inmovilizado. este anticuerpo inmovilizado captura el complejo antes mencionado para formar un emparedado “anticuerpo–antigeno–anticuerpo”. las partículas coloreadas de rosa se acoplan en una zona angosta de la membrana. cuando la concentración de p 30 en la muestra exceda de 4 ng / ml las particulas color rosa formarán una banda en el área de prueba “t”, indicando así un resultado positivo de la prueba. como un control positivo interno, la “mancha” del anticuerpo p 30 es acoplada no podra ligarse al anticuerpo en el área de prueba “t”, pero ya está capturada por el anticuerpo inmovilizador anti inmunoglobulina presente en el área de control “c” formando un complejo. las particulas capturadas de color rosa formarán una banda en el area de control “c” indicando que la prueba funciona correctamentew y que se ha seguido el procedimiento adecuado.

así la presencia de dos líneas de color, una en el area de prueba “t” y otra en el area de control “c” indicarán resultado positivo, mientras que una sola línea en el area “c” indicará un resultado negativo (no dando efecto de gancho en dosis alta).

materiales y reactivos proporcionados

1.-dispositivo para prueba (25 paquetes sellados individualmente para una prueba cada uno).

2.-un gotero y un secante sellado cada uno en una bolsa de prueba.

3.-instrucciones para efectuar la prueba.

materiales requeridos no incluidos

1.-cronometro o reloj.

2.-centrifugadora.

estabilidad, almacenaje y tiempo de vida en anaquel

la prueba de detección dfe p 30 de abacard deberá almacenarse a una temperatura menor de 28° c (82° f). la prueba podra ser almacenada por debajo de la temperatura mencionada hasta la fecha de vencimiento impresa en el saquillo de prueba. no debe congelarse. no se use despues de cumplirse la fecha de caducidad.

colección, preparación y almacenaje de muestras.

los especímenes congelados / manchas / limpiador deberán descongelarse por completo y levarse a una temperatura de entre 2° c y 8° c.

la extracción de especímenes de la mancha o el aplicador deberán efectuarse con 750 microlitros de solución salina amortiguador hepes durante dos horas a la temperatura antes indicada. el agua destilada u otros amortiguadores apropiados tambien pueden ser usados para la extracción de adn. este procedimiento rescatará aproximadamente el 99.9 % del p 30 extraible del aplicador.

centrifugue la muestra durante tres minutos despues de la extracción. remueva 300 ul de la supernata para propositos de prueba. esta alicuota deberá almacenarse a la temperatura de entre 2° c y 8° c en caso de no usarse de inmediato.

en caso de realizar la prueba inmediatamente la muestra deberá ser llevada a temperatura ambiente. la muestra restante podrá ser usada para analisis posteriores sin afectar la calidad del producto de adn.

protocolo de prueba

1.-permita a la muestra alcanzar temperatura ambiente (en caso de haber estado refrigerada).

2.-remueva el dispositivo y el gotero de sus empaques sellados.

3.-etiquete el dispositivo con el número de registro del caso.

4.-agregue 200 ul (8 gotas del gotero aprox.) de la muestra a la muestra del pozo “s” del dispositivo de prueba.

5.-revise resultados depues de 10 minutos. un resultado positivo puede leerse despues de tan solo 1 minuto, dependiendo de la concentración de p 30. para un resultado negativo

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