Tipo de tonciones.

Tincion

Son procediminetos en el cual se precede a tenir las bacterias las mismas que absorven el colorante puesto en una superficie. De esta manera nos permite que las bacterias que son incoloras tomen un color para permitir ser observables claramente; este proceso nos permite el estudio de los microorganismos sin algun tratamiento previo (Santambrosio, Ortega , & Garibaldi, 2009).

Las tinciones se utilizan fundamenalmente en tres cosas; descripcion de microorganismos en base a su morfologia, estructura y distribucion, por otro lado se implementa en la deteccion de determinados microorganismos para su diagnostico con el fin de clasificales segun sus caracteristicas tintoriales (Pisabarro, 2008-2009).

A) Tinciones simples

El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología celular.Se usan un solo colorante disuelto en una solucion acuosa o alcoholica y su suplemento para mejorar la fijacion y su grosor de esta manera nos facilita ver las estructuras de mejor manera como las agrupaciones que formar entre ellos o a su vez entre otras celula, es una tincion directa que solo necesita un tinte y nos permite diferenciar su tamano, arreglo y forma. Ejemplo: tincion negativa .

1. Tinción negativa Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir pero se colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

b) Tinción diferencial

El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula. Estas técnicas utilizan mas de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción. Ejemplos: Tinción de Gram, Tinción de Ziehl-Neelsen, giemsa, grocott, P.A.S, wirtz, etc.

1. Tinción de Gram

La tinción de este tipo más extensamente utilizada es la tinción de Gram, denominada así por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con cierto detalle la tinción de Gram. Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen primero con una solución de cristal violeta (otros colorantes básicos no son tan efectivos) y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado todas las células, tanto las gramnegativas como las grampositivas, están teñidas de azul. La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está, por lo tanto, en la resistencia a la decoloración. Después de la decoloración las células grampositivas son todavía azules, pero las gramnegativas son incoloras. Para poner de manifiesto las células gramnegativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células gramnegativas son rojas mientras que las grampositivas permanecen azules (Lopez , Hernandez , Colin , Ortega , Ceron , & Franco , 2014).

1.1 gram positivas

Las grampositivas se tiñen de morado ya que el colorante se queda atrapado en la capa gruesa de peptidoglucanos que rodea a la célula.

1.2 gram negativas

Las gramnegativas tienen una capa de petidoglucano mucho más delgada es por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las células se tiñen con safranina y las observamos rojas.

2. Tinción diferencial: Método ácido resistente (ZIEHL-NEELSEN)

Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracíón con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. El frotis se tiñe durante unos 5 min con Fucsina fenicada aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etílico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teñir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar.

3. Tinción diferencial para revelar estructuras celulares. Método de Wirtz.

Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas esporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante años. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes: 1.- Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente. 2.- Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas. Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.

4. Giemsa

Giemsa se sigue utilizando en citogenética para observar ADN en diferentes estados de condensación puesto que permite la observación de los cromosomas durante la mitosis e incluso el ADN de las mitocondrias. El azul de metileno de la tinción giemsa se une fuertemente a las regiones ricas en adeninas y timinas del ADN, dando un bandeo característico. El ojo experto es capaz de

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