Tipos de tintes en histología

Introducción

La tinción es una técnica en la que se utilizan diferentes colorantes, que son captados por las estructuras de las muestras biológicas que se observan al microscopio, siendo cada estructura a fin a un tipo determinado de colorante, por lo que se pigmentan de diferente color y se pueden diferenciar e identificar; estos pueden emplearse para distinguir entre diferentes tipos de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, capsulas, etc.

Algunos de los colorantes a utilizar son los siguientes:

Colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánìco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante.

“Tinción simple”

Conocida con ese nombre ya que solo sirve para hacer fácilmente visibles a las bacterias. Una tinción simple se lleva a cabo cubriendo con colorante básico un frotis seco y fijado al calor. El frotis se deja reaccionar con las células por un minuto y se lava suavemente con agua. El frotis se puede dejar secar o usar papel secante para que quede listo para observarse.

TÉCNICA

1. Preparar un frotis de E. coli y fijarlo al calor.

2. Cubrir el frotis con azul de metileno y dejar en reposo por un minuto.

3. Lavar con agua corriente suavemente y dejar secar.

4. Observar con el objetivo de inmersión.

“Tinciones diferenciales”

TINCIÓN DE GRAM

La tinción de Gram, diseñada en 1884 por el bacteriólogo danés Christian Gram clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: Gram Positivas y Gram Negativas. Esta tinción diferencial depende de la estructura de la pared celular de las bacterias.

Las bacterias Gram negativas tienen una membrana externa de la que carecen las bacterias Gram positivas.

TÉCNICA

1. Preparar un frotis de E. coli, uno de S. aureus y uno con una mezcla de ambos microorganismos.

2. Dejar secar y fijar al calor como se indica.

3. Teñir con cristal violeta por un minuto.

4. Enjuagar con agua corriente suavemente y escurrir.

5. Cubrir el frotis con Yodo de Gram y dejar reposar por un minuto.

6. Enjuagar con agua corriente y escurrir

7. Decolorar con etanol al 95%. Para esto, incline el portaobjetos sobre la charola de tinción y añada goteando el etanol, dejando que corra por todo el frotis. Para un frotis delgado es suficiente con 10 a 20 segundos.

8. Detener la acción decolorante lavando con agua.

9. Contrastar con safranina por 20 a 30 segundos, enjuagar y dejar secar el frotis.

10. Examinar con el objetivo de inmersión.

Tinción de ziehl neelsen

Esta tinción permite diferenciar micobacterias, bacterias con ácidos micólicos en su pared celular pertenecientes a los géneros Mycobacterium y Nocardia. Los ácidos micólicos hacen que las microbacterias resistan, no sólo la decoloración con alcohol como las Gram positivas sino la decoloración con una mezcla de ácido y alcohol capaz e decolorar al resto de las Gram positivas.

TÉCNICA

1. Se realiza el frotis.

2. Se aplica el colorante fuscina de Ziehl sobre la muestra y se deja reposar.

3. Luego se emplea la llama de un mechero para calentar la muestra hasta la aparición de vapores blancos. El calor se emplea como mordiente, gracias al calor los lípidos de la pared dejan pasar el colorante para que se combine con los ácidos carboxílicos de la pared, así

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