Transaminacion De Proteinas

PRÁCTICA # 9

DEGRADACIÓN DE AMINOÁCIDOS

I. OBJETIVOS

a. Estudiar la transaminación de alanina y aspartato, utilizado como fuente enzimática un preparado de hígado de pichón.

b. Aplicar e interpretar la técnica de cromatografía en capa fina

II. MARCO TEÓRICO

La mayor parte de la energía la obtiene le ser humano del catabolismo de carbohidratos y grasas, pero hay un 10% que proviene de la oxidación del esqueleto carbonado de los aminoácidos. Si la cantidad de aminoácidos provenientes del recambio proteico normal del organismo, excede al de aminoácidos necesarios para la síntesis proteica, entonces este exceso de aminoácidos ha de ser catabolizado, ya que los aminoácidos no pueden almacenarse, a diferencia de los glúcidos o grasas. Por otra parte, las pretinas del organismo también pueden utilizarse como combustible cuando la ingesta de hidratos de carbono es insuficiente, o hay alguna patología que impida su utilización, como la diabetes mellitus (Teijón et al., 2006).

La degradación de aminoácidos en los mamíferos se produce esencialmente en el hígado. Inicialmente se produce la eliminación del grupo alpha-amino de los aminoácidos, y entonces el esqueleto carbonado resultante es catabolizado, transformándose en intermediarios importantes, los cuales pueden generar ácidos grasos, cuerpos cetonico y glucosa. En cuanto a los grupos alpha-amino, se transforman mayoritariamente en urea, que es excretada (Teijón et al., 2006).

Las transaminasas son enzimas presentes en la mayoría de los tejidos animales, que catalizan una de las importantes reacciones del metabolismo de las proteínas, la transferencia reversible del grupo amino desde aminoácidos hacia un cetoácido; el aminoácido que pierde el grupo amino se convierte en un nuevo cetoácido, y el cetoácido que lo gana se convierte en el aminoácido respectivo. El cofactor de estas enzimas es el piridoxal fosfato y para casi todas las transaminasas, α-cetoglutarato es el aceptor del grupo amino formándose glutamato:

El interés clínico está centrado especialmente en dos transaminasas:

• L-Alanina:α-cetoglutarato aminotransferasa ( Transaminasa Glutámico Pirúvica o TGP)

• L-Aspartato. Α-cetoglutarato aminotransferasa (Transaminasa Glutámico Oxalacética o TGO).

Estas enzimas tienen una acción eminentemente intracelular, por lo que la actividad sérica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de actividad será evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales resultan particularmente importantes el corazón y el hígado.

Se ha observado que luego de un infarto de miocardios se produce en el cuero un marcado aumento de la actividad de TGO, debido a la liberación al torrente sanguíneo de esta enzima, tan abundante en el miocardio. En este caso no existirá un aumento en la actividad sérica de TGP o será mínimo.

En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis de tejido, habrá también un incremento considerable de la actividad sérica de transaminasas, incluso antes de la aparición de síntomas clínicos como ictericia. En este caso, TGP será el enzima predominante debido a su gran concentración en el tejido hepático. Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en otras condiciones como traumas accidentales o quirúrgicos, pancreatitis aguda, distrofias musculares, etc.

En la presente práctica se estudiara:

1) La transaminación de la alanina y el aspartato con el α-cetoglutarato en presencia de un preparado enzimático de hígado de paloma, mediante un método cromatografico.

III. PARTE EXPERIMENTAL

A) Transaminación en presencia de un preparado enzimático de hígado de pichón.

Procedimiento

1. Preparación de la fuente enzimática (polvos acetonicos)

Los hígados recientemente extraidos de 4 pichones de paloma son homogenizados en 10 volúmenes de acetona fría durante 1 minuto. Luego de filtrar y lavar varias veces, el residuo obtenido es secado a temperatura ambiente, obteniéndose asi polvos secos fáciles de conservar. El día de la práctica se muelen en un mortero: 700 mg de polvos acetónicos con 7 ml de agua destilada y luego se centrifuga el preparado a 2000 rpm por 10 minutos. Se decanta el sobrenadante y se completa al volumen a 35 ml con agua destilada.

La cetona, por su acción deshidratante facilita la extracción de enzimas de los tejidos. En esta forma, la acetona reduce la desnaturalización de las proteínas y concomitantemente produce

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