SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCIÓN

En los hábitat naturales, los microorganismos crecen en poblaciones mixtas y complejas, que contienes varias especies. Esto representa un problema para el microbiólogo porque no se puede estudiar adecuadamente un único tipo de microorganismo en un medio mixto. Se necesita un cultivo puro, población de células que procede de una única célula, para caracterizar una especie individual. Los cultivos puros son tan importantes, que el desarrollo de las técnicas de cultivos puros por el bacteriólogo alemán Robert Koch transformó la microbiología. En casi 20 años, se aisló la mayoría de los agentes patógenos responsables de las principales enfermedades infecciosas humanas (Prescott, Harley, Klein, 2004).

El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayoría de los casos, mediante la producción de colonias aisladas en cultivos sólidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran número de ellas a partir de una única célula inicial de forma que, tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).

Se denomina cultivo puro (axénico) al que contiene sólo un tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la misma composición genética. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las características de los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad.

Sin embargo, cada vez se va conoce más sobre el funcionamiento de las comunidades bacterianas lo que debe hacernos reflexionar sobre el hecho de que un cultivo puro supone unas condiciones no naturales y que, por consiguiente, la fisiología de los microorganismos en ambientes naturales puede ser diferente de la que presentan en condiciones de cultivos puros.

Si se extiende una mezcla de células sobre una superficie de agar, cada célula aislada se multiplicará formando una colonia independiente, formación o agrupación macroscópica visible de microorganismos sobre un medio sólido: cada colonia representa un cultivo puro. La siembra por extensión es una forma directa y fácil de conseguir este resultado. (Prescott, Harley, Klein, 2004).

La siembra en profundidad que se emplea frecuentemente con bacterias y hongos, puede también generar colonias aisladas. La muestra original se diluye varias veces para reducir la población microbiana lo suficiente con el fin de obtener colonias separadas cuando se siembren. (Prescott, Harley, Klein, 2004).

Las colonias aisladas se pueden obtener también mediante siembra en estrías. Las células individuales se irán desprendiendo del asa al frotarla sobre la superficie y desarrollarán colonias aisladas. Las colonias que crecen sobre la superficie se pueden utilizar también para inocular un medio fresco y preparar cultivos puros. (Prescott, Harley, Klein, 2004).

El objetivo de la práctica es aprender a realizar las diferentes técnicas de aislamiento de microorganismos y a realizar la siembra de los mismos en medios de cultivo.

MATERIALES Y MÉTODO

Dilución

Se encendió el mechero y con un cultivo de Escherichia coli y con una pipeta, se extrajo 1 ml del cultivo, el cual se colocó en un tubo de ensayo que contenía 9 ml de agua destilada. Luego con la pipeta se extrajo 1 ml de la solución del tubo de ensayo y se le vertió en otro tubo de ensayo, que contenía 9 ml de agua destilada. Se repitió lo descrito anteriormente, todo se realizó muy cerca del mechero. Luego, con los dos últimos tubos de ensayo, se sumergió el asa de siembra esterilizado para obtener solución, y se le colocó en una caja Petri con agar, extendiéndolo en ella. Finalmente se envolvió con papel para poder llevarlo a la incubadora.

Extensión

Encendido el mechero, se insertó el asa de siembra esterilizado en el cultivo de Escherichia coli, luego se realizó una extensión en la caja de Petri con Agar.

Agotamiento por estrías

Se encendió el mechero y se extrajo con el asa de siembra esterilizado un poco de muestra del cultivo de Escherichia coli. Luego, en la caja Petri con Agar setrazaron 5 líneas paralelas sobre la superficie del medio. Luego se esterilizó el asa de siembra y sin tomar un nuevo inóculo. Se realizó otra serie de líneas paralelas de tal forma que atraviesen las primeras. Se realizó esto teniendo en cuenta que se debe hacer una sola estría por última vez.

RESULTADOS

GRUPO 1

Método de Siembras por Estrías

Caja Petri N° 1 EM Contaminantes

Forma de la colonia Circular Circular; Puntiforme; Fusiforme.

Elevación Convexa Convexa; Elevada.

Margen Entero Entero; Ondulado; Lobulado.

Pigmentación Crema Blanco; Negro; Amarillo; Naranja.

Cantidad Abundante Escasa

Consistencia Mantecosa Viscosa; Mantecosa; seca.

Método por Difusión en Placa

Caja Petri N° 2 EM Contaminantes

Forma de la colonia Circular Puntiforme; Fusiforme.

Elevación Convexa Monticular; Umbilicada; Elevada.

Margen Entero Ondulado; Erosionado; Rizado.

Pigmentación Crema Blanco; Amarillo.

Cantidad Abundante Media

Consistencia Mantecosa Viscosa; Mantecosa; seca.

Tubos de ensayo

Agar inclinado

Cantidad Abundante

Margen Con irregularidades

Consistencia Viscoso

Pigmentación Blanquesina

Agar en columna

Cantidad Moderado

Distribución Línea

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