UTILIDAD CLINICA

LA UTILIDAD CLÍNICA DE LA CUANTIFICACIÓN DE PLAQUETAS INMADURAS

RESUMEN

Las Plaquetas Inmaduras son un marcador de la actividad trombopoyetica de la médula ósea megacariocitica.

Ellos pueden ser medidos por citometria de flujo, sin embargo, la estandarización de esta prueba no ha sido muy acertada hasta ahora. Sysmex XE-2100 es un sistema automatizado en hematología, una fracción de plaqueta inmadura (IPF) puede ser medida con la alta reproductibilidad entre estos instrumentos.

El IPF es un instrumento útil para evaluar trombocitopenia: la trombocitopenia es causada por la destrucción o el consumo de plaquetas, como p.ej. en trombocitopenia inmune o trombocitosis trombocitopenica purpura, el IPF es elevado como una reacción compensatoria de la médula ósea. La trombocitopenia es debida a la supresión de la médula ósea, p.ej. después de que la quimioterapia o el trasplante de células madre, los IPF son bajos o normales.

El IPF también puede ser usado para supervisar las enfermedades antedichas y potencialmente puede ayudar a ahorrar transfusiones de plaqueta.

Las plaquetas son derivadas de megacariocitos

Las plaquetas son pequeñas células sin núcleo con forma de disco con diámetro de 2-3 m. La fuente de plaquetas son los megacariocitos. Estos son sacados de la célula madre pluripotente hematopoyética y casi todos ellos son encontrados en la médula ósea donde forman una fracción de menos del 1 % de todas las células mieloides. Un megacariocito puede formar miles de plaquetas. Principalmente bajo la influencia de trombopoyetina los megacariocitos crecen a un tamaño de aproximadamente 100 µm de manera concomitante multiplicando su ADN los cuales van desarrollando una red expansiva de cisternas y túbulos, llamado el sistema de membrana de demarcación (DMS). Estas membranas sirven como un depósito para la formación de megacariocitos entre 100-500 µm los cuales están mucho tiempo como proplaquetas, al igual que las salientes tubulares que provienen del megacariocito. De las puntas de estas proplaquetas las plaquetas son liberadas en al torrente sanguíneo.

Las plaquetas recién liberadas contienen el ARN, que probablemente no son producidos por las plaquetas mismas, pero que proviene del megacariocito.

Estas plaquetas jóvenes han sido llamadas " plaquetas inmaduras " o " plaquetas reticulares " o " plaquetas altamente fluorescentes”. Después de 1-2 días las plaquetas inmaduras sueltan la mayor parte de su ARN desarrollándose en plaquetas "maduras", que tienen una vida en la circulación de aproximadamente una semana. Las plaquetas contienen gránulos, los cuales pueden ser liberados después del estímulo.

Estudios más tempranos elevaron el interés de medir plaquetas inmaduras para investigar condiciones trombocitopenicas

El estudio se hizo en perros de raza beagle, después de una pérdida de sangre inducida aguda, las plaquetas producidas eran más grandes en tamaño que las plaquetas normales y mostraron un modelo grueso de puntos puntiformes cuando se tiñeron con azul de metileno y que después fueron observadas al microscopio. Las células que contuvieron el ARN y en la analogía al glóbulo rojo reticulocitico fueron llamados " plaquetas reticulares”. El ARN dentro de las plaquetas reticulares puede ser medido usando citometria de flujo y un tinte fluorescente que ata al ARN, como la naranja thiazol. A principios de los años 90 fue demostrado por Kienast y Schmitz que en la condición clínica la trombocitopenia se debida al consumo aumentado o a la destrucción de plaquetas (con los números normales o elevados de megacariocitos en la médula ósea) el porcentaje de plaquetas teñidas con naranja de thiazol era considerablemente más alto que en los casos de trombocitopenia debido a la producción de plaqueta perjudicadas (con la médula ósea reducida por los megacariocitos). Esta observación sugirió de que la medida de plaquetas inmaduras pudiera ser muy provechosa al facilitar el diagnóstico diferencial de trombocitopenia y supervisar condiciones trombocitopenicas, p.ej. después de la quimioterapia citotóxica. El interés adicional surgió en la utilidad clínica de medir plaquetas inmaduras con citometria de flujo en condiciones de trombosis como el golpe o en el síndrome agudo coronario.

Hasta ahora, la estandarización de la citometria de flujo para la medida de plaquetas inmaduras no ha sido acertada

Como una consecuencia de estos usos potenciales clínicos, las tentativas fueron hechas para estandarizar citometria de flujo para la medida de plaquetas inmaduras. En el 2002, la Sociedad Internacional de Hematología (ISLH) para las Plaquetas Reticulares la Taskforce trató de alcanzar la estandarización usando un protocolo de acuerdo general bien definido sobre los juegos de 50 muestras normales en 8 laboratorios diferentes. Las plaquetas inmaduras fueron identificadas al ser teñidas con naranja thiazol y usando las plaquetas con anticuerpos específicos anti-CD41 y Anti-CD61, ambos marcados con un tinte fluorescente. Todos los datos brutos fueron analizados en una posición central para evitar diferencias del procedimiento gating. Sin embargo, a pesar de todos estos esfuerzos, el medio de las muestras investigadas de varios pacientes es muy variable entre los diferentes laboratorios. Lamentablemente, no hay en ninguna parte una citometria de flujo satisfactoria este procedimiento podría reproducible y así permitiría una medida de plaquetas inmaduras en los diferentes laboratorios del mundo entero.

Las Plaquetas inmaduras ahora pueden ser medidas como una prueba rutinaria con el analizador hematológico Sysmex XE-2100

Con el analizador hematológico Sysmex XE-2100 (la Corporación Sysmex, Kobe, Japón) las plaquetas pueden ser medidas (la fluorescencia) con el sistema óptico el cual toma es el reticulocito/el canal de plaquetas. El ARN en las células es teñido usando un colorante fluorescente que contiene polymethina y oxazina. Las células pasan por un rayo láser y la luz dispersa avanzada y la fluorescencia de las células es medida. En el scattergrama (fig. 1) la fluorescencia es trazada sobre la abscisa mientras la luz avanzada dispersada es trazada sobre la ordenada.

Un algoritmo del ordenador identifica el número de plaquetas en el scattergrama. La mejora del sistema SYSMEX XE-2100 se da gracias a el software Maestro con el cual recientemente es liberado el IPF que permite distinguirse las plaquetas inmaduras de las maduras aplicando un algoritmo especial gating.

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