Evaluacion Del Estado Inmunologico

Evaluación del estado inmunológico.

Introducción.

En los laboratorios clínicos se dispone numerosas técnicas para determinar las causas mas comunes de las fallas o alteraciones en los mecanismos de respuesta inmune. Además, en los laboratorios de investigación se puede evaluar en mayor detalle el funcionamiento de una celula de un sistema , la ausencia o la alteración en la expresión de una citoquina o de una enzima, o detectar anormalidades en un mecanismo especifico, por medio de las pruebasde biología molecular. En este trabajo mencionaremos los procedimientos de uso común en los laboratorios clínicos y algunos de los disponibles en los laboratorios especializados

Evaluación de la inmunidad innata.

Para evaluar la inmunidad innata se deben cuantificar y evaluar las células del sistema inmune y varias proteínas. De las células es posible cuantificar el número, las subpoblaciones, el fenotipo, y sus funciones de respuesta a la quimio taxis, fagocitosis y participación en la inflamación. Las proteínas que se deben estudiar son las de fase aguda como proteína C reactiva (CRP), interferones, citoquinas, quimioquinas y factores del sistema del complemento.

Recuento diferencial y morfología de las diferentes células.

La evaluación de un leucograma y el estudio de un extendido de sangre periferia permiten detectar anormalidades como granulocitos y leucemias y tener una idea de la morfología y numero de plaquetas.

Evaluación de la quimiotaxis.

Con el empleo de la Cámara de Boyden se mide la respuesta migratoria de los PMN frente a un estímulo quimio táctico.

Prueba de la agarosa.

En una capa de agarosa depositada en una caja de Petri se perforan tres orificios equisdantes. En la central se deposita la suspensión de células del paciente en estudio y en los laterales la sustancia quimioatrayente y el tampón control. La distancia de migración de las células hacia el pozo que contiene la sustancia quimioatrayente se compara con la distancia de migración hacia el pozo con el tampón control.

Ventana cutánea de Rebuck.

Es una prueba que permite establecer si la llegada de PMN y Mo ocurre en la cantidad y frecuencia adecuadas.

Evaluación de los fagocitos.

Es necesario cuantificar el número de PMN y de Mo, asi como su funcionalidad.

Recuento de glóbulos blancos.

La presencia de un adecuado numero de neutrófilos no es garantía absoluta de que ellos estén cumpliendo la función de defensa. Existen varias técnicas para detectar el índice de fagocitos. Una de ellas es la quimioluminicencia, que se basa en la medición de la cantidad de radiación electromagnética que emiten los PMN después de la ingestión de microorganismos.

Evaluación del sistema de complemento.

Actividad hemolítica total.

Ante la sospecha de una alteración en este sistema, debe hacerse una determinación por la técnica conocida como CH50. Si esta se encuentra disminuida, indica que el sistema ha sido activado.

Dosificación individual de factores.

Las determinaciones de mas uso en la clínica, en el estudio de enfermedades autoninmunes y en la monitorización de los rechazos de trasplantes, son las de los factores C3 y C4. En laboratorios de investigación se puede medir cada uno de los veinte componentes diferentes del sistema. Su dosificación se hace normalmente por la técnica de inmunodifusion radial.

Evaluación de la inflamación.

Eritrosedimentacion.

Es un índice inespecífico de la existencia de inflamación, que no orienta sobre la localización o la causa. Un valor normal descarta una infección bacteriana.

Dosificación de la proteína C reactiva.

Es una prueba inespecífica de inflamación. Mide la concentración de una proteína en suero conocida como “proteína C reactiva” que es producida por el hígado y cuyos niveles se incrementan notoria y rápidamente durante episodios de inflamación aguda.

Prueba de liberación de histamina.

Evalula, por las técnicas de Osler y Campbell, la degranulacion de los mastocitos y basófilos.

Evaluación de la inmunidad celular adquirida.

Evaluación de los linfocitos.

Extendido de sangre.

Este simple examen puede dar indicio, bien sea porque permite establecer la ausencia, disminución o incremento de linfocitos o alteraciones en su morfología. La presencia de una numero aparentemente normal excluye un defecto funcional en ellos, pero su ausencia o disminución alertan de inmediato sobte la presencia de una inmunodeficiencia especifica.

Recuento total de linfocitos en sangre periférica.

Menos de 1.000 por ml indica deficiencia. Un incremento en el numero indica infección o proliferación maligna.

Estudio de subpoblaciones de linfocitos.

Es necesario dar los siguientes pasos:

• La separación de los linfocitos: de las demás células sanguíneas, lo cual se logra por meido de centrifugaciones por densidad diferencial para lo cual se emplean concentraciones variables de Ficoll-hipaque.

• Marcar las diferentes subpoblaciones por medio de AcMc conjugados con fluocromos, (fluorescencia, rodamina, etc) contra las diferentes moléculas CD que caracterizan las distintas subpoblaciones de L.

• Citometria de flujo, técnica de análisis células de parámetros multiples que se basa en pasar una suspensión de células de una en una, por delante de una haz de lase focalizado. El impacto del rayo de luz sobre cada celula produce señales ópticas que corresponden a diferentes parámetros celulares y que son captadas por distintos detectores. Estos convierten dichas señales en electrónicas que posteriormente se digitalizan para permitir cuantificar el numero de los diferentes L. los aproximados para las principales subpoblaciones de L son:

CD3+ 60% a 75%

CD4+ 20% a 25%

CD8+ 20% a 30%

L y S 5% a 10%

L B CD22+ 8% a 15%

NK CD16+ 7% a 15%

Clasificación del grado de desarrollo de los L.

Con AcMc que reconozcan las diferentes CD presentes en las membranas de los L y Mo, es posible determinar el grado de desarrollo o madurez de las diferente scelulas. Es útil en la clasificación de las leucemias por las implicaciones pronosticas y de tratamiento que tienen el poder de stablecer el grado de maduración de los L.

Evaluación de las células NK.

Para cuantificarlas, las NK se pueden separar de otras células mononucleares de sangre periférica por gradientes de Ficoll-hipaque y por medio de AcMc contra CD16, CD56 y CD57.

Estudio de las citoquinas.

Detección de citoquinas y su cuatificacion.

Existen juegos reactivos comerciales que permiten detectar y cuantificar cada una de las citoquinas.

Evaluación de la inmunidad humoral adquirida.

Se hace acudiendo a diferentes métodos para cuantificar las inmunoglobulinas, o evaluar las reacciones de Ag-Ac. Un 20% de las proteínas plasmáticas son inmunoglobulinas.

Medición de las diferentes clases de inmunoglobulinas.

Se hace por medio de electroforesis que permiten evidenciar deficiencias muy marcadas de laguna de ellas. Alteraciones importantes pueden pasar de desapercibidas por este procedimiento.

Inmunoelectroforesis (IEP).

Es una técnica que pone en evidencia la falta de una clase de Ig.

Dosificación individual de Ig G, A y M.

La cuantificación de la IgM específica contra Ag bacterianos sirve para determinar si hay una infección aguda. Su presencia en el cordon umbilical denota que huno una infección en la vida intrauterina. La cuantificación de los diferentes Ac contra los virus de la hepatitis A y B permite, en los casos de ictericia, hacer el diagnostico diferencial de la clase de hepatitis, el estado de inmunidad y la fase de desarrollo o complicación de la infección.

Dosificación de la IgE.

Esta Ig es citolitica, sus concentraciones plasmáticas son pequeñas y no dosificables por la inmunodifusion radial por lo cual es necesario acudir a la nefelometría, procedimiento que se basa en la dispersión de una radiación que atraviesa partículas.

Evaluación de las reacciones Ag-Ac.

Los métodos in vitro buscan , en primer lugar identifica si hay o no un Ac, y en segundo lugar, buscan cuatificarlo. Se lo puede detectar por medio de las pruebas que se detallan a continuación.

Fracciones de precipitación.

Son las que ocurren entre moléculas de un Ag soluble y el Ac correspondiente.

Inmudifusion doble (Ouchterlony).

Permite la detección de complegos Ac-Ag específicos y la evaluación de su reacción cruzada. Un patrón de bandas de identidad sugieren que ambos sueros contienen Ac contra el mismo determinante antígeno (idénticos). El patrón de no identidad indica que ambos presentan Ac específicos pero no dirigidos contra diferentes epitopes del Ag, y el tercer patrón de identidad parcial indica que ambos sueros presentan Ac contra epitopes relacionados pero no idénticos.

Inmunodifusion radial simple(SRID, Manzini).

Se usa para cuantificar Ac. El suero que se sospecha los contiene, se deposita en los pozos y se usa el gel que contiene el Ag. El Ac se difunde hasta formar un anillo de precipitación cuando alcanza su equivalencia. El área del anillo es proporcional a la concentración de Ac. El Ag se puede medir de forma similar usando un gel con Ac.

Aglutinación.

Cuando la acción del Ac esta dirigida a antígenos que están en la superficie de células o que hacern parte de membranas de microorganismos, el Ac produce agregación de las diferentes células dando lugar al fenómeno llamado aglutinación. La reacción suele ser mas visible cuando el Ac es de tipo IgM que cuando es IgG. Es una reacción útil en el diagnostico del tifo exantemantico y fiebre tifoidea. Lo es igualmente para la clasificación de los grupos mayores de los globulos rojos, sistemas ABO y Rh.

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