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5.- Tecnicas Basicas Para El Cultivo de Microorganismos

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Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones.

Organizar el material para su fácil manejo e identificación.

Manipular adecuadamente los cultivos...

PRÁCTICA # 5

“TÉCNICAS BÁSICAS PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS: SIEMBRA Y ESTUDIO DE BACTERIAS”

INTRODUCCIÓN

Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlos bajocondicione artificiales, en los que es posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo demicroorganismo. Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en transferir unamuestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivosmicrobianos. A l efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el área de trabajo, existen muchosotros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren ycontaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también lascondiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH yconcentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la temperatura, aireación la luminosidad.La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así comosu aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación ycontrol de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propósitoespecífico del estudio.

OBJETIVOS:

ξ

Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones.

ξ

Organizar el material para su fácil manejo e identificación.

ξ

Manipular adecuadamente los cultivos puros.

ξ

Seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar propósitos específicos.

ξ

Identificar y describir correctamente las características culturales y microscópicas de algunas bacterias.

ξ

Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscópico y microscópico de bacterias.

MARCO TEÓRICO:

Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de éste en medios de cultivo ycondiciones de laboratorio controladas. La población de microorganismos desarrollada en un medio se denominacultivo. Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo, se denomina

cultivo puro

o

axénico

, cuandocontiene más de una especie de microorganismos se denomina

cultivo mixto

. Un cultivo tipo contiene una especieconocida de microorganismos y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios.Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente de una sola célula. Los cultivos axénicosson muy raros en la naturaleza. En los medios naturales -por ejemplo, en el suelo, agua, o en el cuerpo humano-existen cultivos mixtos. En un cultivo mixto, viven muchas y diferentes especies de forma conjunta. Un cultivoaxénico se obtiene artificialmente en el laboratorio. A la hora de obtener un cultivo axénico se han de tomar precauciones especiales, ya que los microorganismos están por todas partes, en la naturaleza, en el laboratorio yen los instrumentos y recipientes usados en los experimentos. Estos microorganismos no deseados ocontaminantes

deben ser eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El segundo paso paraobtener un cultivo axénico es inocular o introducir, una sola célula de un microorganismo en un medio sólido oliquido, esterilizado previamente. De esta manera, aislamos un solo microorganismo del resto y se podrámultiplicar en condiciones favorables. Un

clon

está constituido por una población de células descendientes de unsolo microorganismo. Una colonia es un clon lo suficientemente grande como para ser visible sobre la superficiede un medio sólido.Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz, debe ser transferidoa un medio de cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden continuar. En estatransferencia se deben considerar dos aspectos básicos referentes a: no introducir microorganismos indeseables(contaminantes) y concentración o carga microbiana de la muestra (inóculo) a sembrar.

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Para impedir la contaminación de los cultivos, es necesario tener plena conciencia de la ubicuidad de losmicroorganismos, lo que determina que el aíre y todas las superficies estén densamente pobladas por microorganismos, de este modo en la transferencia de una muestra microbiológica a otro recipiente, se debentener una serie de cuidados que eliminen los riesgos de contaminación. Estos incluyen el área de trabajo, ellavado de las manos, la esterilización de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear y realizar latransferencia del microorganismo en una zona estéril, la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero.Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama técnica aséptica; elseguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como:

o

La contaminación y pérdida del cultivo en estudio

o

La salida y dispersión de microorganismos del cultivo, lo que ocasionaría la contaminación de utensilios,productos y del personal. Este último aspecto es particularmente importante cuando se trabaja concultivos de microorganismos patógenos.Con relación a la concentración del inóculo, un error frecuente del principiante consiste en tomar muestrasgrandes, lo que es innecesario. Una colonia de bacterias del tamaño de la cabeza de un alfiler contiene variosmillones de microorganismos, es obvio que con una cantidad pequeñísima (casi invisible) que se adhiera al asa,será más que suficiente para efectuar una transferencia exitosa.

Dispositivos empleados en la transferencia de muestras microbianas:

hisopo, pipeta (para uso microbiológico sonterminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida con filtro de algodón), pipeta pasteur, cable de Kolleo portasa con alambre de platino dispuesto en forma de: aguja, asa, espátula y/o gancho.En la transferencia de microorganismos se emplean agujas, asas de inoculación, hisopos, pipetas o pipetaspasteur que deberán esterilizarse previamente. La utilización de estos dispositivos, así como de los diferentesmedios de cultivo tienen aplicaciones específicas. Por ejemplo: los medios líquidos se preparan en tubos omatraces que se cubren con tapones de algodón o tapones especiales. Un cultivo líquido puede ser transferidomediante un asa microbiológica, un hisopo, pipeta o pipeta pasteur; el inóculo se deposita dentro del caldo omedio líquido. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiestaen la superficie o a través de todo el líquido. Una de las ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a laposibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo decultivos, las poblaciones se encuentran suspendidas y e fácil homogenizarlas, lo que permite estandarizar laconcentración del

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