Quimica Farmaceutica

La figura 1 muestra el cromatograma de HPLC-UV a 201nm de EAE (A) TEE (B) y TF (C). La tabla 1 detalla los fragmentos mayoritarios para cada peak observados en los cromatogramas de ESI-MS y MS/MS, correspondientes a los triterpenoides: ácido asitiaco (7,5 min), ácido alfitolico (24,3min), ácido corosolico (26,8 min), ácido betulinico (49,6 min) y una mezcla de ácido ursolico y oleanolico (51,2 min).

Nosotros pudimos observar también la presencia de otros dos triterpenoides no identificados aun en esta especie: ácido madecasico (5,2 min) y ácido maslinico (29,1 min).

La señal en HPLC de TF, como subfracción purificada de triterpenoides de TEE, muestra un importante realce del área de triterpenoides comparada con TEE original (tabla 2).

La presencia de ácido madecasico en EAE y TF detectada por HPLC-UV-ESI-MS fue confirmada por análisis en TLC donde un punto azul (reactivo acido ) con Rf 0,22 (n-buOH-EtOAc-NH3-H2O (6:4:0,5:1)) fue coincidente con la muestra estándar de ácido madecasico. Una prueba adicional de la presencia de ácido madecasico (figura 2) fue el aislamiento de una muestra de TF por cromatografía en columna y posterior TLC.

Los datos de MNR concuerdan con los de la literatura (paper 2004). El ácido maslinico (figura 2) fue también identificado en las de EAE, TEE y TF por patrón de fragmentación en MS/MS (paper 2009), su estructura fue confirmadad por la información espectral MNR (paper 2003).

Actividad antiinflamatoria tópica

La actividad antiinflamatoria contra el edema de la oreja de raton inducida por TPA de 1 mg/oreja fue de 43,3 ± 4,2 %. En nuestros estudios previos (Aguirre paper 2006), la misma dosis de EAE y TEE mostraron una actividad de 83,1 ± 3,2 y 78,3 ± 11,8 % respectivamente. El efecto fue estadísticamente significativo comparado con el control grupal. El efecto antiinflamatorio puede estar en parte relacionado con la presencia de ácidos corosolico, asiático, betulinico, ursolico y oleanico presentando un valor de ED50 0,19 y 0,13; 0,66; 0,21 y 0,65 µmol/oreja respectivamente (paper 2006, 2004, 2005). Es también importante remarcar que la existencia de polifenoles en estas especies pueden contribuir a la actividad antiinflamatoria, desde Rubilar (2005) se mostró que en las hojas de murtilla son una rica fuente de antioxidantes polifenolicos: flavonoides glucosidicos???? De quercetina, miricetina y kaempherol, los que son ampliamente conocidos por sus actividades antiinflamatorias y analgésicas (Delporte 2007) los que están presentes mayoritariamente en TEE, como fue confirmada en nuetro laboratorio por el método Folin-Ciocalteu (datos no mostrado).

Ambos triterpenoides y los compuestos polifenolicos aparecen en TEE y contribuyen al efecto antiinflamatorio de este extracto el cual resulta casi dos veces más activo que la subfraccion rica en triterpenoides, TF (paper 2005).

El HPLC-UV-ESI-MS fingerprints de TF demuestra que esta subfraccion rica en triterpenoides mantiene y realza la composición triterpénica de TEE (tabla 2). Pudimos observar en los cromatogramas de EAE, TEE y TF, diferencias cualitativas en su composición triterpénica y también diferencias relativamente cuantitativas cuando se compara las áreas bajo la curva entre TEE y TF (tabla 2).

En este trabajo demostramos que los ácidos madecasicos y alfitolicos también presentaron una actividad antiinflamatoria tópica dependiente de la dosis con la ED50 de 0,11 y 0.20 µmol, respectivamente, comparado a un ED50 de 0,38 µmol

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