Realizar las técnicas de examen directo Kato-Miura y Ritchie

Objetivos de la práctica:

•Analizar las ventajas desventajas y aplicaciones de las técnicas GPS que se utilizan con frecuencia en un laboratorio clínico

•Realizar las técnicas de examen directo Kato-Miura y Ritchie

•Analizar si los exámenes de concentración muestran mayor probabilidad de encontrar parásitos en las muestras de heces fecales.

Introducción:

En algunos lugares de México donde la prevalencia y porcentajes, así como la variedad de parásitos intestinales que infectan al hombre se considera indispensable emplear técnicas CPS eficaces rápidos confiables y de bajo costo para utilizarlas en la demostración con material fecal de pacientes afectados.

Las técnicas cualitativas se utilizan para conocer la morfología de las formas parasitarias encontradas ya sea quistes y trofozoítos de protozoarios o huevos larvas de adultos pertenecientes a helmintos, así como el adulto.

Los métodos cualitativos son: examen directo de solución salina y lugol se utiliza cuando pretende demostrar la presencia de formas parasitarias como quistes o trofozoitos en forma rápida siendo útil sólo cuando se utiliza solución salina si se utiliza el lugol sólo se observarán quistes o huevos ya que el lugol destruye los filósofos trofozoítos sin embargo es poco eficaz ya que demuestra que se analiza es muy pequeña y posiblemente el parásito se localiza en otro lado de la misma.

Los métodos de concentración son más eficaces ya que se analiza una cantidad mayor de la muestra y se realiza una concentración de la misma estos métodos pueden ser de dos tipos: sedimentación y flotación.

Los exámenes de concentración por sedimentación.

Material.

Reactivos:

* solución salina isotónica

*lugol parasitológico

*solución de formar al 10%

*éter etílico comercial

*solución de MIF con desinfectante

Material de vidrio:

Portaobjetos

cubreobjetos

pipetas pasteur con bulbo

Asa bacteriológica

recipientes de plástico con capacidad de 100000 litros para muestras de heces

embudo de tallo corto de 8 centímetros de diámetro

tubos de ensayo de 13 X 100 de fondo cónico con capacidad de 15 mililitros

aplicadores de madera

gasas

centrífuga

microscopio

Procedimiento.

1.- realiza el examen directo colocado en un portaobjetos 2 gotas una de solución salina al 0.9% y el otro extremo una gota de lugol toma la muestra de excremento con un aplicador de madera y realiza una suspensión primero en la solución salina y después con la muestra que haya quedado re suspende el lugol coloca encima de cada gota un cubreobjetos y observa al microscopio.

Utilidad. - ácido de método indicado para la búsqueda de trofozoitos en la práctica ha demostrado su eficacia cuando se utiliza lugol para la identificación de quistes huevos o larvas

Limitaciones. - la muestra utilizada es tan pequeño que es poco representativa

Para convertir la fuerza centrífuga relativa o gravedades

g=(1.118x10-5) RS2

R es él radio de la centrifuga en cm y S es la velocidad de rpm

Método de Ritchie (Formol-Ether)(concentración por sedimentación)

1.-agregar 2/3 partes de agua al frasco donde se encuentra la muestra de excremento

2.- agitar y depositar en un tubo de ensayo un poco de la suspensión según sea de concentración la muestra , 3/4 partes del tubo

3.-agregar agua a la muestra hasta llenar el tubo dejando 3 centímetros libres

4.- agregar aproximadamente un mililitro de éter etílico colocan un pedazo de plástico o papel parafilm y el dedo pulgar para tapar la boca del tubo y agitar fuertemente durante un minuto

5.-centrifugar estuvo durante 3 minutos a 2400 rpm al sacar el tubo de la centrífuga se observan varias capas de grasa donde se encuentran muchos restos se eecata el sobrenadante

6.- al sedimento se le agregan dos o tres gotas de lugol para suspender el sedimento colocar una gota entre Porta y cubre y observa al microscopio con el objetivo de 10x y 40x

Utilidad.- se usa para huevos quistes y larvas No importa la densidad que tengan hacen muy buenas concentraciones de estas formas para citar pues eliminan bastantes de detritos orgánicos con el éter el motivo se usa el formol es para mantener la integridad de las formas parasitarias que concentra por sus características que del fijador la mayoría de los parapsicologos conoce este método como de formol-éter

Limitaciones.-debido a que se usan varios reactivos y tubos cónicos resulta poco económico en las preparaciones quedan muy sucias porque con la sedimentación aparte de concentrarse formas parasitarias se concentran artefactos que interfieren con la lectura.

Observaciones.

Técnica de Kato-Miura es un método que se considera directo.

1.-preparar el papel celofán con verde de malaquita según se indica en el manual

2.-Una vez que se tiene el papel celofán se coloca una muestra de heces fecales en un aplicador Aproximadamente 50 mg y se deposita sobre el portaobjetos

3.-cubrir con un cuadro del papel celofán impregnado de verde malaquita glicerol como si fuera un cubreobjetos

4.-presiona al reverso de la muestra con la ayuda de un tubo de ensayo con tapón de hule de madera que la muestra de copro se extiende en todo el papel celofán

5.-deja reposar la muestra unos minutos y después observar al microscopio

6.-observada preparación y contar toda las formas parasitarias de 2 en mitos y multiplicarlo por 20 = a número de huevos por gramo de heces (h.g.h) o mililitros de heces (h.ml.h).

Utilidad.-

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