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ANÁLSIS CONFIRMATIVO DE PROPORCIONES MENDELIANAS EN CRUCES MONOHÍBRIDOS Y DIHÍBRIDOS USANDO Drosophila melanogaster COMO ORGANISMO MODELO


Enviado por   •  19 de Abril de 2018  •  Apuntes  •  2.780 Palabras (12 Páginas)  •  226 Visitas

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ANÁLSIS CONFIRMATIVO DE PROPORCIONES MENDELIANAS EN CRUCES MONOHÍBRIDOS Y DIHÍBRIDOS USANDO Drosophila melanogaster COMO ORGANISMO MODELO

Paula Alejandra Moreno1, Bernardo Posada1, Miguel Ángel Rendón1

Universidad del Rosario, Facultad de Ciencias Naturales y Matemáticas, Biología, Asignatura Genética

INTRODUCCIÓN

Drosophila Melanogaster es un insecto perteneciente al orden Díptera de la familia Drosophilidae. También conocido comúnmente como mosca de la fruta, masco del vinagre o mosca del vino. Es un organismo modelo en el campo de la genética. Usada por primera vez en el año de 1901 por William E. Castle (Rosales. 1999). Al ser un organismo modelo (Rosales, 1999) estos deben cumplir con ciertas características, como tener ciclo de vida corto, el cual en D.melanogaster tiene una duración de 15 a 21 días en el cual se incluye las etapas de huevo, larva y adulto. Este ciclo de vida corto permite al experimentador ver los efectos a lo largo de múltiples generaciones. Además, sus condiciones ambientales están bien definidas, sus requerimientos nutricionales son de fácil acceso y viables y su número de cromosomas es reducido (Reiter et al. 2001). También se ha estudiado para comprender la evolución, la biología del desarrollo y la biología molecular (Rubin et al. 2000).

Son organismos diploides, los cuales poseen 4 pares de cromosomas. De estos cuatro pares tres son autosomales y solo un par sexual. Su sexo está definido por el cromosoma sexual X, siendo las hembras XX y los machos XY, donde el cromosoma Y no juega papel en la determinación sexual pudiendo ser una hembra XXY. El genoma de Drosophila contiene 14.000 genes aproximadamente y 180Mb (Adams et al. 2000). Existen muchas mutaciones diferentes en este organismo, de las más conocidas son Yellow (Cuerpo amarillo), White eyes (Ojos blancos) y Vestigial wing (Alas vestigiales).

Para entender más de la genética mendeliana, Drosophila es un buen organismo. Es por esto en el presente informe escogimos 3 mutaciones distintas para poder observar las frecuencias de cruces monohíbridos y dihíbridos, según los experimentos de Mendel. En esta ocasión los mutantes fueron: Vestigial y Yellow para los cruces monohíbridos (en cruces separados) y para el dihíbrido, Vestigial y White. Los números de los descendientes mutantes y silvestres fueron contados y sexados.

MÉTODOS

Con el fin de comprobar la veracidad de la segregación de los resultados obtenidos en cada uno de los ensayos, se empleó la prueba estadística de Chi-cuadrado para tratar los datos. Este análisis estadístico busca contrastar homogeneidad de muestras contenidas en tablas de contingencia. Está basado en el contraste de una hipótesis y que tanto de los eventos contenidos dentro de la tabla de contingencia se ajustan a esta. Esto se puede calcular por medio de la probabilidad de que los eventos hayan ocurrido aleatoriamente y que tanto de esa probabilidad estemos dispuestos a permitir, en lo que es llamado como grados de libertad (Cañadas et al. 2012). Dado que esta prueba usa un área bajo la curva de probabilidades en su función, determinaremos que un evento no es aleatorio cuando su probabilidad de que ocurra de manera aleatoria sea del 0.05 (Cañadas et al. 2012).

Para el montaje de los diferentes ensayos elaborados en este proyecto, se utilizaron moscas provenientes del cepario de Drosophila melanogaster del Departamento de Biología ubicado en las instalaciones de la Universidad de los Andes. Los cultivos empleados presentaron tres diferentes mutaciones: alas cortas (Vg), cuerpo amarillo (Y) y ojos blancos (W), junto con el fenotipo silvestre el cual es de alas normales y cuerpo amarillo oscuro y ojos rojos.

Para la preparación del medio en el cual las moscas estarían encerradas para reproducirse, se emplearon aproximadamente 200gr de la fórmula 4-24® Instant Drosophila Medium, Blue, 4 L con referencia 173212 a la cual se le añadió aproximadamente 2ml de agua. Esta cumpliría la función de materia prima para las levaduras que fermentarían el contenido para formar el fermentado del cual se alimentarían las moscas y larvas durante el proceso de cruce. Se agregaron alrededor de 0,01 gr de levadura a cada uno de los frascos, se taparon con algodón esterilizado y se introdujeron en frascos esterilizados para evitar la contaminación o enfermedad del cultivo. Se incubaron los cultivos de 7-14 días a una temperatura aproximada de 26°C con una humedad relativa del 35%.

Al momento de contar la cantidad de individuos obtenidos en cada una de las filiales con sus respectivas mutaciones se procedió a utilizar dióxido de carbono para dormirlas. Las moscas eran sacadas de la incubadora y trasladas a frascos más pequeños con adaptación para válvula de gas. Las moscas quedarían anestesiadas y preparadas para clasificarlas y sexarlas mediante la utilización de un estereoscopio para observar las características físicas de estas.

Se elaboraron 2 tipos de cruces Monohíbridos y dihíbridos.  Divididos en 5 diferentes ensayos como se muestra a continuación:

Monohíbrido Cruce I

Para este, se escogieron cinco machos de las colonias originales que presentaran la mutación Vestigial (alas cortas) y se cruzaron con cinco hembras vírgenes de fenotipo silvestre. Luego, de aproximadamente 14 días se obtuvo la F1 y se procedió a realizar la F2, nuevamente con cinco machos y cinco hembras seleccionados aleatoriamente de la F1. Para este nuevo cruce, se realizaron dos conteos de la descendencia en un intervalo de 15 días.

[pic 2]

Fig. 1 Esquema general del cruce I de tipo monohibrido. Cinco machos de alas vestigiales junto con cinco hembras vírgenes de tipo silvestre.

Monohíbrido-Cruce II

En este ensayo, se seleccionaron cinco hembras vírgenes mutantes para el color del cuerpo amarillo (Yellow) y se cruzaron con cinco machos fenotípicamente silvestres. Posteriormente, se esperaron aproximadamente 7 días para obtener la F1.

[pic 3]

Fig. 2. Esquema cruce II de tipo Monohibrido. Cinco hembras Yellow cruzadas con cinco machos fenotípicamente silvestres.

Monohíbrido-Recíproco cruce II

Para este último ensayo de tipo monohíbrido, se eligieron cinco machos mutantes para el carácter Yellow de las colonias originales obtenidas de la Universidad de los Andes, las cuales se cruzaron con cinco hembras silvestres y consecutivamente se obtuvo la F1 en aproximadamente 14 días.

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