Aminoacidos

Introduccion

La cromatografía se engloba dentro de las llamadas técnicas de separación y permite el análisis de mezclas complejas de compuestos muy estrechamente relacionados químicamente. Son varias las modalidades usadas y se clasifican según la fase móvil (de gases, líquida) y por el tipo de soporte (columna, capa fina, papel) usados.

La separación se lleva a cabo según la distinta interacción que presenta cada uno de los componentes de una muestra respecto a dos fases: una estacionaria y otra móvil que fluye sobre ella. Esta interacción puede ser de varios tipos que a su vez dan lugar a distintas subclases de cromatografía: de absorción, de reparto, de cambio iónico, de afinidad, etc.

Peinado 2010

En esta práctica, vamos a usar la más simple de ellas, la cromatografía ascendente sobre papel.

Metodología

Preparamos una tira de papel Whatman para cromatografía, marcando con un lápiz una línea de aplicación a 2.5 cm de uno de los extremos después colocamos una gota de lisina en nuestro equipo, dejando a los demás equipos con los otros 3 aminoácidos a utilizar: alanina, valina y leucina. Colocamos el papel en la cubeta de la cámara cromatografía y reposamos una hora y media.

La cubeta contenía liquido solvente (Butanol - Ac. Acético - Agua destilada 4:1:1)

Después de hora y media quitamos las tiras de la cámara, marcamos el frente del solvente (con lápiz), y dejamos secar las tiras a temperatura ambiente

Asperjamos las tiras con una solución de ninhidrina en spray y secamos de nuevo.

Colocamos las tiras en la estufa a 100° C durante 10 minutos.

Medimos la distancia a la que avanzo el solvente con relación a la línea de aplicación y la distancia de las

manchas (las cuales representan los diferentes aminoácidos, con respecto a la línea de aplicación.)

Lisina .14

Alanina .38

Valina .60

Leucina .73

Resultados y Discusión

cuadro de resultados según el aminoácido y la distancia

que recorrió

Aminoácido Solvente Valor Rf

Lisina 3.5 12.5 .28

Alanina 4.7 10.4 .45

Valina 7 10.7 .7

Leucina 8 11 .72

La cromatografía en papel es un método de separación y aislamiento de sustancias. Se basa en dos fases; la fase móvil que es una capa de solvente orgánico que asciende por la capilaridad por el papel, en este caso el butanol, y la fase estacionaria que es papel filtro. La ninhidrina nos revela las posiciones de los aminoácidos (Lisina, Alanina, Valina y Leucina), utilizadas en la práctica como manchas de color violeta.

La polaridad relativa establece la movilidad cromatografía. Los aminoácidos con grandes grupo R no polares en este caso la leucina migran más lejos que aquellos con grupo R no polares más cortos o con grupos R polares

...