Aminoacidos

Introduccion

La cromatografía se engloba dentro de las llamadas técnicas de separación y permite el análisis de mezclas complejas de compuestos muy estrechamente relacionados químicamente. Son varias las modalidades usadas y se clasifican según la fase móvil (de gases, líquida) y por el tipo de soporte (columna, capa fina, papel) usados.

La separación se lleva a cabo según la distinta interacción que presenta cada uno de los componentes de una muestra respecto a dos fases: una estacionaria y otra móvil que fluye sobre ella. Esta interacción puede ser de varios tipos que a su vez dan lugar a distintas subclases de cromatografía: de absorción, de reparto, de cambio iónico, de afinidad, etc.

Peinado 2010

En esta práctica, vamos a usar la más simple de ellas, la cromatografía ascendente sobre papel.

Metodología

Preparamos una tira de papel Whatman para cromatografía, marcando con un lápiz una línea de aplicación a 2.5 cm de uno de los extremos después colocamos una gota de lisina en nuestro equipo, dejando a los demás equipos con los otros 3 aminoácidos a utilizar: alanina, valina y leucina. Colocamos el papel en la cubeta de la cámara cromatografía y reposamos una hora y media.

La cubeta contenía liquido solvente (Butanol - Ac. Acético - Agua destilada 4:1:1)

Después de hora y media quitamos las tiras de la cámara, marcamos el frente del solvente (con lápiz), y dejamos secar las tiras a temperatura ambiente

Asperjamos las tiras con una solución de ninhidrina en spray y secamos de nuevo.

Colocamos las tiras en la estufa a 100° C durante 10 minutos.

Medimos la distancia a la que avanzo el solvente con relación a la línea de aplicación y la distancia de las

manchas (las cuales representan los diferentes aminoácidos, con respecto a la línea de aplicación.)

Lisina .14

Alanina .38

Valina .60

Leucina .73

Resultados y Discusión

cuadro de resultados según el aminoácido y la distancia

que recorrió

Aminoácido Solvente Valor Rf

Lisina 3.5 12.5 .28

Alanina 4.7 10.4 .45

Valina 7 10.7 .7

Leucina 8 11 .72

La cromatografía en papel es un método de separación y aislamiento de sustancias. Se basa en dos fases; la fase móvil que es una capa de solvente orgánico que asciende por la capilaridad por el papel, en este caso el butanol, y la fase estacionaria que es papel filtro. La ninhidrina nos revela las posiciones de los aminoácidos (Lisina, Alanina, Valina y Leucina), utilizadas en la práctica como manchas de color violeta.

La polaridad relativa establece la movilidad cromatografía. Los aminoácidos con grandes grupo R no polares en este caso la leucina migran más lejos que aquellos con grupo R no polares más cortos o con grupos R polares en este caso la Lisina y la Alanina. La proporción entre la distancia a la cual viaja un aminoácido y la distancia a la cual viaja el frente del solvente es el valor Rf que es la movilidad relativa respecto al frente del solvente. Dando como resultados del Rf.

Los valores Rf para un aminoácido determinado pueden variar según las condiciones experimentales como por ejemplo el solvente utilizado.(Murray, 2001)

Los aminoácidos apolares son los que mejor interaccionan con el solvente y son arrastrados por él; la lisina presenta la menor movilidad debido a que al pH del solvente, este aminoácido presenta sus dos grupos amino cargados positivamente por lo que interacciona mal con el solvente, mayoritariamente apolar (n-butanol). Los demás aminoácidos se separan entre los aminoácidos apolares y el básico Bohinski, 1991

Se utilizó la ninhidrina debido a que sirve para la determinación de aminoácidos con el grupo amino

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