Bacillus Thuringiensis A PARTIR DE LOS LODOS GENERADOS EN LOS DESARENADORES DE LAS PLANTAS POTABILIZADORAS DE AGUAS DE LA CIUDAD DE VALLEDUPAR- CESAR

INTRODUCCION

Los vectores de enfermedades de suelos agrícolas son una amenaza constante para la salud y la calidad de vida humana, son causas de grandes perdidas económicas en los cultivos, hasta ahora la única forma eficaz de controlar estos insectos plagas se basa en la aplicación de insecticidas químicos aunque estos traen como consecuencias problemas ecológicos, por lo tanto el uso irracional de los agroquímicos ha sido causa de la contaminación ambiental en todo el mundo-. Estos problemas por plagas aumentan cada día mas, y muchos de ellos se han agravados por le desarrollo de la resistencia y por la aparición de nuevas plagas debido a al destrucción de sus enemigos naturales. (Hernández, A.2002).

Estas consecuencias han despertado el interés de investigadores y de la población en general para disminuir su uso y buscar nuevas alternativas para el control de insectos dañinos, así como para solucionar los problemas de contaminación ambiental.(Márquez, F.2007).

El control biológico es una estrategia de control que tiene mas de 110 años, donde utiliza un organismo natural o modificados genéticamente y sus productos para reducir los efectos d e insectos plagas. Se ha reportado la existencia de mas de 1500 especies de microorganismos entomopatógeno con potencial para el control microbiano de insectos, se encuentran hongos, virus, protozoarios y bacterias, donde estas ultimas son las de mayor importancia; y las mas sobresaliente pertenecen al genero Bacillus, dentro de este se encuentra Bacillus thuringiensis, como la principal bacteria entomopatógena a nivel mundial, constituyendo el bioinsecticida de mayor éxito comercial utilizado para el control de plagas. (Carreras, M.2009)

Esta investigación plantea la necesidad de aislar Bacillus thuringiensis de los lodos de los desarenadores de la Planta de Tratamiento De Agua Potable Emdupar S.A E.S.P, y crear una colección amplia de cepas que tengan potencial para controlar Dípteros como Aedes aegypti u otros ordenes como Lepidóptera, Coleóptera etc. , de tal manera que se disponga de cepas caracterizadas para realizar bioensayos en una forma eficiente.

METODOLOGIA

MUESTREO

Se llevó a cabo un muestreo sistemático en X, a los dos desarenadores (uno grande, y un pequeño) (Carrera M.2009) (Márquez, F.2007).

El proceso de muestreo se efectuó dos veces. El primer muestreo se realizó en el periodo de lluvias (invierno) y el segundo en periodo seco (verano). Esto se hizo con el fin de determinar las variaciones que se pueden presentar para el aislamiento de Bacillus thuringiensis. Por cada periodo se tomó una (1) muestra integrada respectivamente.

En cada punto de muestreo se tomó 4 submuestras, con un área de 9m2 y en superficie 0.10 cm, en cada punto se tomó 1 Kg. Estas muestras fueron recolectadas en bolsas plásticas estériles para su transporte al laboratorio. Cada muestra fue identificada de la siguiente manera: Numero de muestra, Periodo de muestreo, Sitio de muestreo, Fecha y Nombre del Investigador. Cada una estas submuestras se mezclaron y homogenizaron hasta obtener 1 Kg de lodo, obteniéndose una única muestra. (Márquez, F.2007)(Carreras, M.2009)

Aislamiento e identificación de Bacillus thuringiensis

Se tomó 10g de la muestra, se suspendió en 90 ml de agua destilada estéril, se sometió a agitación vigorosa; De la suspensión se realizaron diluciones de 10-1 hasta 10-3, los tubos se incubaron a un baño de maria 70ºc por 30 minutos, con el objetivo de seleccionar las esporas presentes (Flórez, A y col. 2011).(Carmona,A.2002)

Luego se dejo en hielo por el mismo tiempo, posteriormente se sembraron en agar nutritivo, incubándose a 28 ºC por 48 h. Después se examinaron las colonias crecidas, seleccionándose por su aspecto y morfología a simple vista. (Rodas, J.2009)(Mireles, M.2006)

Las colonias de Bacillus thuringiensis se distinguieron por su contorno irregular, color blanco mate, y textura lisa. (Carmona, A.2002)

Luego se observaron al microscopio de fase, seleccionando las colonias por la presencia de la espora característica de esta bacteria (Poveda J, y col.2008).

Para la identificación se realizaron tinciones simples como la tinción de Gram y la tinción Writz, para observar las células vegetativas y esporas.

Luego estas colonias fueron resembradas en placas de Petri con agar nutritivo por 3-5 días A 28 ºC, para verificar la presencia del cuerpo paraesporal y definir su forma. Después se determinó el índice de Bacillus thuringiensis obtenido de la relación del número de colonias a las que estuvo asociado el cuerpo paraesporal y el número de colonias examinadas con las características culturales de Bacillus (Carrera, B.2009).

De cada aislado identificado se obtuvo una

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