CULTIVO DE CALLOS

Cultivo de callos

A. BARBA ÁLVAREZ

LEÍ conocimiento de esta forma de tejido vegetal se remonta hasta la época de Aristóteles, quien ya mencionaba el uso y las bondades del injerto y la unión de éste por medio del callo; también los antiguos naturalistas ya se cuestionaban sobre el tejido tumoroso que presentaban algunas plantas, el cual contenía la estructura celular típica del callo,

En los tiempos modernos, dos investigadores europeos, Nobecourt y Gautheret, y un norteamericano, White, hicieron en 1939 las pri¬meras observaciones sobre la proliferación de grandes masas de tejido desorganizado, derivadas de raíces de zanahoria (Daucus carota) y del procambium del tallo de tabaco (Nicotiana sp.), colocadas en un me¬dio nutritivo artificial adicionado con vitaminas y sacarosa.; Estas masas celulares se mantuvieron indefinidamente por medio de la fragmentación y subcultivo constante a medio de cultivo nuevo (Butcher e Ingram, 1974).

Hasta antes de la década de los sesentas no hubo resultados claros acerca de la génesis y desarrollo de este tejido, tanto en condiciones naturales como in vitro.j'En los últimos 20 años se han obtenido res-puestas a estas incógnitas, como también se ha aprendido a utilizar el callo en la investigación en fisiología vegetal (Savidege, 1983), orga-nogénesis (Christiann, 1983; Myerson y Krull, 1982), embriogénesis (Turnham y Northcote, 1982), genética (Ashmore y Gould, 1981), fitotoxicología (Mumma y Hamilton, 1983; Marg, et al., 1983) y es¬tudios de ultraestructura celular (Sjolound, et al., 1983a; Sjolound y Shih, 1983b), así como también en la propagación de plantas (Ab¬bott, 1978).] Actualmente se le da énfasis al área de síntesis y extrac¬ción de productos naturales, como son los fármacos (Deus y Zenk, 1982).

MORFOLOGÍA Y CITOLOGÍA

Se puede definir el callo como un tejido obtenido por medio del aislamiento de órganos o tejidos diferenciados, los cuales posteriormente son llevados a una desdiferenciación celular, presentando estas células una proliferación continua, acelerada y de apariencia desorganizada, que da origen a una masa amorfa de tejido. Esta masa celular -• puede presentar diferentes tipos morfológicos, los cuales varían según la apariencia externa, textura y composición celular (Butcher e Ingram, 1974). Algunos callos son masas celulares compactas y duras, con células íntimamente unidas, mientras otras forman tejidos esponjosos con una gran cantidad de espacios intercelulares.

La coloración de este tejido también varía, aun derivando de la -¡ misma especie (se pueden presentar callos que carecen de pigmentación, mientras otros pueden ser de diferentes tonos de verde, amarillo, ( café o rojo).í El tipo y grado de pigmentación está marcadamente influenciado por factores nutricionales y ambientales, y se manifiesta por la presencia de clorofila, carotenos, antocianinas, etcétera.

Estudios microscópicos han demostrado que los tejidos de tipo calloso generalmente son heterogéneos en su composición celular; es decir, un mismo callo puede presentar varios tipos celulares. La diversidad celular presente en el callo depende de muchos factores, como son el origen del tejido, la edad de los cultivos y la composición de los medios (Savidge, 1983; Bornman, et al., 1977). Un callo homogéneo, consistente en un solo tipo celular, raramente se encuentra, aun cuando se han encontrado cultivos puros de células del tipo parenquimatoso en cultivos de agave (Agave sp.) y de rosa (Narayanas-mamy, 1977).

El callo está generalmente constituido por una alta proporción de células en las que las vacuolas son predominantes, similares a las células del parénquima; el Callo también contiene pequeñas zonas de células en división, que por medio de un manejo adecuado pueden formar nódulos vasculares y meristemoides, los cuales se encuentran localizados y las condiciones tísicas que prevalecen durante esta etapa (Dodds y 1 Roberts, 1982). /'" ¿.Desde el punto de vista morfogénico, la característica más importante del callo es la totipotencialidad desús célulasjya que, en general, con un manejo adecuado de las condiciones nutricionales, hormonales y ambientales, tienen la capacidad de desarrollar brotes, raíces, embriones, etc.plos cuales pueden llegar a formar plántulas completas, aunque algunas veces (Myerson y Krull, 1982) en Gynura aurantiaca estas células pueden presentar diferencias morfológicas y fonológicas con respecto á plantas de la misma especie, propagadas tradicional--mente. Un serio problema asociado con este tejido es el daño o modificación de la citología nuclear de las células durante el cultivo. Se pueden presentar aberraciones cromosómicas (Kallak y Yarveking, 1977), mutaciones puntuales (Herke, 1980) y diferentes tipos de ploidías (Kibler, et ai, 1980; Novek, 1980), así como irregularidades cariocinéticas, que se manifestarán por sus consecuencias implícitas. Se ha observado que la frecuencia de estas anormalidades generalmente se incrementa conforme aumenta la edad de cultivo, además de que la proporción con la que se presentan tales cambios está relacionada con la composición del medio y con la especie vegetal con la /que se esté trabajando; sin embargo, los cambios cromosómicos pueden ocurrir a partir del inoculo inicial. Esta inestabilidad cromosómica ¡ es el obstáculo principal en la utilización del callo en estudios de genética y fitomejoramiento vegetal (Dodds y Roberts, 1982; Laksmi, etai, 1982).

en las áreas periféricas superficiales o dentro del tejido, y que serían centros para la formación de meristemos apicales, primordios radiculares "o embriones incipientes. Estas zonas de división de células diferenciadas o desdiferenciadas generalmente se presentan dando origen a las masas amorfas de tejido aparentemente desorganizado. Por otra parte, las células altamente vacuoladas presentan una diversidad muy amplia de formas,

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