Curva de glucosa bioprocesos
Enviado por tecamacho • 5 de Noviembre de 2023 • Prácticas o problemas • 766 Palabras (4 Páginas) • 24 Visitas
Nombre del Alumno: Teresita De Jesús Camacho Barraza ID: 00000212928
Practica 2. Curva de concentración de glucosa
Departamento de Biotecnología y Ciencias Alimentarias, Instituto Tecnológico de Sonora, 5 de febrero 818 Sur, CP85000, Cd. Obregón, Sonora, México.
Palabras clave: Curva de calibración, determinación de glucosa, reactivo DNS, espectrofotometría
Introducción.
Una curva de calibración es una técnica analítica que [pic 1]
permite determinar la concentración de un analito de
interés a partir de una muestra problema (Hernández
et al, 2002).
Las técnicas basadas en espectroscopia de absorción
permiten identificar y cuantificar compuestos de
interés biológico. Estas técnicas son utilizadas en
mediciones de glucosa y se realizan en la banda del
espectro conocida como visible (Sandrea et al, 2006)
La determinación de glucosa durante un bioproceso es parte esencial para el monitoreo y control de cultivos celulares, fermentaciones microbianas y otras aplicaciones biotecnológicas donde la concentración de glucosa puede influir en la producción de productos biológicos o metabolitos, por ello es importante definir metodología que estandaricen y automaticen la determinación de glucosa en diversas etapas del bioproceso.
Metodología.
Curva patrón de Glucosa
Se preparó la solución patrón de Glucosa (1 g en 100 ml de agua), a las concentraciones de 0.5, 0.7,0.9, 1.1, 1.3, 1.5, 1.7 y 1.9 g/L de agua (Tabla 1), posterior a ello se adiciona reactivo DNS, para llevar acabo la reacción de DNS, de acuerdo a lo estipulado en el desarrollo de reacción DNS.
Tabla 1. Preparación de curva patrón de glucosa
Concentraci ón g/L | ml de agua destilada | Solución de glucosa en agua |
0.5 | 1.9 | 0.10 |
0.7 | 1.86 | 0.14 |
0.9 | 1.82 | 0.18 |
1.1 | 1.78 | 0.22 |
1.3 | 1.74 | 0.26 |
1.5 | 1.70 | 0.30 |
1.7 | 1.66 | 0.34 |
1.9 | 1.62 | 0.38 |
Desarrollo de reacción de DNS.
En tubos de cristal de 10 ml se adiciona 0.5 ml de
Figura 1. Calentamiento de glucosa con DNS
Resultados y discusiones
Durante la reacción DNS, el ácido 3,5 dinitrosalicílico reacciona con la glucosa oxidando los azucares reductores presentes en la muestra formando el ácido 3-amino-5 nitro salicílico y ácido gluónico (Figura 2)
Figura 2. Reacción DNS [pic 2]
El método se basa principalmente en la reducción del DNS por la glucosa u otro azúcar reductor al ácido 3-amino-5- nitrosalicílico, cuya presencia puede detectarse por lectura de la absorbancia en la zona de 540-600 nm (MILLER, 1959). Esta reacción se basa en la capacidad de los azúcares reductores para reducir el reactivo DNS, que es una solución de 3,5-dinitrosalicilato de sodio, a un compuesto de color rojo-anaranjado llamado 3- amino-5-nitrosalícilico. La intensidad del color formado se correlaciona con la concentración de azúcares reductores en la muestra.
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