CÁLCULOS DE SOLUCIONES PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN
Enviado por mamfy • 17 de Agosto de 2021 • Tareas • 3.507 Palabras (15 Páginas) • 162 Visitas
Tecnológico Nacional de México Instituto Tecnológico de La Paz Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica | «Ciencia es verdad, técnica es libertad» Enero-Junio 2020 Biotecnología molecular PREPARACIÓN DE SOLUCIONES |
[pic 1][pic 2]
- CÁLCULOS DE SOLUCIONES PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN
BUFFER 1
- Se ocuparán 300 μL para cada alumno, considerando una cantidad de 45 personas se estima preparar un volumen final de 25 mL de Buffer 1.
Fundamento: es conocido como Buffer de lisis para la extracción de ADN, compuesta por sales que ayudan a la regulación de la acidez y de la osmolaridad del lisado, además está compuesta de detergentes que se encargan de romper las estructuras de membrana de la célula (Cariaga Martínez & Zapata, 2007).
Composición | Cantidad a utilizar | |
Tritón 100X | 2% | [pic 3] |
SDS | 1% | [pic 4] |
NaCl | 100 mM | g [pic 5] |
Tris | 10 mM pH 8 | g[pic 6] |
EDTA |
| [pic 7] |
[pic 8]
EDTA 1mM
Fundamento: (Ácido etilen diamino tetra acético). Es un agente quelante de iones metálicos (Ca++ y Mg++). Los cuales inhiben la acción de las nucleasas al no encontrar cofactores libres para su actividad, de esta manera esta solución protege el ADN. Usualmente esta solución se prepara a un pH 8, debido a la quelación eficiente que ejerce el EDTA por los iones de calcio, formando una estabilidad del complejo formado (Rodríguez Serrano, 2011).[pic 9]
Clasificación NFPA 704 (Rombo de seguridad) de EDTA
- Stock EDTA a 0.5 M para un volumen final de 25 mL
Fórmula y Datos | Despeje | Cálculo |
[pic 10] Pm = 292.24 [pic 11] | )[pic 12] | [pic 13] de EDTA a 0.5 M en un volumen de 25 mL de agua destilada.[pic 14] |
- Preparación de EDTA 1mM a un volumen final de 25 mL
Fórmula y Datos | Despeje | Cálculo |
[pic 15] | [pic 16] | [pic 17] L de EDTA 0.5M para preparar EDTA 1mM en 25 mL de agua destilada.[pic 18][pic 19][pic 20] |
SDS 1%
Fundamento: (Dodecil sultato de sodio) detergente aniónico que actúa como agente soluble de proteínas, tejidos y membranas. Evitando que una cantidad significativa de ADN quede atrapada en los desechos o residuos celulares (Velasco Mosuera, 2005).
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Clasificación NFPA 704 (Rombo de seguridad) de SDS
- Stock de SDS al 10%, tomando en relación p/v, por lo que se tomará 5 g de SDS en 25 mL de agua destilada
- Cálculos de la solución SDS al 1% a partir del stock preparado (SDS 10%)
Fórmula y Datos | Despeje | Cálculo |
[pic 22] | [pic 23] | [pic 24] de SDS 10% para preparar SDS 1% en 25 mL de agua destilada[pic 25] |
Tritón 100X 2%
Fundamento: detergente que permite desorganizar las membranas biológicas, además de inducir la ruptura de las mismas, importante en la extracción de ácidos nucleicos (Ríos Sánchez et al, 2016).
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Clasificación NFPA 704 (Rombo de seguridad) de Tritón 100X
Fórmula y Datos | Despeje | Cálculo |
[pic 27] | [pic 28] | [pic 29] de Tritón 100X para preparar Tritón 100X al 2% en 25 mL de agua destilada.[pic 30] |
NaCl 100mM
Fundamento: (Cloruro de sodio). Las sales aumentan el poder iónico de la solución, ocasionando la precipitación del ADN. Es decir, el NaCl se emplea para prevenir la contaminación de la muestra con polisacáridos que pueden afectar la pureza del ADN, además de inhibir algunas enzimas como: polimerasas, ligasas y edonucleasas de restricción (Cariaga Martínez & Zapata, 2007).
Clasificación NFPA 704 (Rombo de seguridad) de NaCl[pic 31]
Fórmula y Datos | Despeje | Cálculo |
[pic 32] Pm= 58.44 [pic 33] | )[pic 34] | [pic 35] g de NaCl para preparar NaCl 100 mM en 25 mL de agua destilada.[pic 36] |
Tris 10 mM pH 8
Fundamento: (Hidroximetil amonio metano). Es un tampón biológico que mantiene el pH de la solución constante, entre un pH de 7.0-8.0.
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Clasificación NFPA 704 (Rombo de seguridad) de Tris base
Fórmula y Datos | Despeje | Cálculo |
[pic 38] Pm=121. 14 [pic 39] | )[pic 40] | [pic 41] de Tris base para preparar Tris 10 mM en 25 mL de agua destilada.[pic 42] |
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