Estudiar la presencia de ciertos componentes químicos en el interior de las células sanguíneas

Se basa en técnicas de tinción

El objetivo es estudiar la presencia de ciertos componentes químicos en el interior de las células sanguíneas hematopoyéticas y de sangre periférica.

Todas tienen tres etapas: fijación, incubación y contraste.

Mencionamos las más usadas en la actualidad:

-FOSFATASA ALCALINA GRANULOCITARIA: se usa sobretodo en el estudio de los síndromes mieloproliferativos y para corrovorar el diagnóstico de l. mieloide crónica (valores muy bajos o nulos)

-MIELOPEROXIDASA: sirve para diferenciar la l.mielocítica de la linfocítica aguda, es específica de los elementos de la granulopoyesis (da positiva solo en la mielocítica)

-NEGRO SUDÁN: detecta la actividad de la peroxidasa por tanto es equivalente a la anterior

-ESTERASAS: son enzimas que al reaccionar con ésteres en presencia de una sal diazoica forman un colorante azoico

-PAS (reacción del ac. Periódico de Schiff): el ac.peryódico (agente oxidante) libera grupos aldehidos que al combinarse con el reactivo de schiff se forma color rojo

CITOQUIMICA:

La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica.

En una reacción bioquímica hay tres pasos fundamentales:

1.- Fijación: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraldehído, formaldehído, etc.

2.- Incubación en el medio de reacción: como consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reacción.

3.- Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma.

Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad.

Las muestras a estudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea, improntas de tejidos y células impactadas mediante citocentrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes.

PAS

La reacción de PAS o del ácido peryódico de Schiff se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos por la acción del ácido peryódico, potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso.

La reacción del PAS ha perdido utilidad en el diagnóstico hematológico después de la aparición de mejores marcadores. Sigue teniendo interés en la diferenciación de diferentes tipos de leucemias linfoblásticas, en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias.

PEROXIDASA

La demostración citoquímica de esta enzima se basa en la acción oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de peróxido de hidrógeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reacción.

La mieloperoxidasa se sintetiza en el retículo endoplasmático rugoso, de donde pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulación 1ª o azurófila.

Dicha enzima se combina in vivo con peróxido de hidrógeno transformándose en un potente agente bactericida, viricida y fungicida.

La aplicación fundamental de la mieloperoxidasa se refiere a la capacidad discriminatoria entre celularidad blástica mieloide y linfoide, ya que los mieloblastos muy precoces sin estigmas de diferenciación mieloide ya pueden ser mieloperoxidasa positivos.

FOSFATASA

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