GUIAS BIOQUIMICA METABOLICA
Enviado por NANITA86 • 14 de Octubre de 2013 • 1.069 Palabras (5 Páginas) • 525 Visitas
Cinética Enzimática de
la ureasa
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I. Objetivos
Producir la hidrólisis de la urea por medio de la enzima
amidohidrolosa denominada UREASA.
Analizar el electo que produce la variación de la concentración
del sustrato (UREA), corn respecto a !a velocidad de la reacción
enzimática
Determinar por mélodo experimental los principales parámetros
que rigen la cinética enzimática, tales como: constante de
Michaelis; velocidad máxima, constante de velocidad y energía
de activación.
II.Conceptos Previos
¿Oué significan los siguientes términos:
Biocatalizador; proteína; Enzima; Cinética química; Velocidad de
reacción; específica de velocidad, Energía de activación; Sustrato;
Hidrólisis; Incubación; pH; Solución buffer; Tilulación; lnhibidores
enzimáticos?
III.Fundamento Teórico
La UREASA es una enzima amídohidrolosa de peso molecular:
480.000 Daltons, punto isoeléctrico: 5.0 y pH óptimo entre 6 y 7.
Cataliza la hidrólisis de la urea produciendo gas carbónico,
hidróxido de amonio, seqún la reacción
H2N-CO-NH2 + 3H2O 2NH4OH + CO2
En presencia de una solución buffer de_fosfatos con pH = 7.0 y a una
Ureasa
pH=7,0,T=37°C
Universidad Nacional Abierta y a Distancia-UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA
Programas: Zootecnia , Agronòmica e Ingeniería Agroforestal-IA
Laboratorio de Bioquímica Metabólica-BM
Prof: Jairo Granados.,MSc
Cinética Enzimática de
la ureasa
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temperatura de incubación de 25°c, la ureasa presenta una
constante de Michaelis de 10,5 mmol/L.
Los principales inhibidores de su actividad enzimática. Son los iones
metálicos pesados tales corno la plata (Ag+1) el mercurio (Hg+2) e
igualmente el ácido hidroxámico y la tiourea Se encuentra en varios
tejidos vegetales como en el haba de soya lo cual implica que pueda ser
usada en análisis de alimentos para determinar urea, ya Sea por el
método de Kjeldhal o por titulación del amonio liberado. De esta forma, al
titular el hidróxido de amonio producido por la hidrólisis, se puede calcular la
cantidad de urea hidrolizada, utilizando el método estequiométrico, puesto
que se producen 2 moles de NH4OH por cada mol de urea desdoblada. Por
lo tanto, esta reacción puede utilizarse con éxito en la determinación de
urea en sangre, orina, suelos y otros materiales orgánicos. Dada la alta
especificación por el sustrato sobré el que actúa, la reacción permite
observar el curso de la cinética de Míchaelis-Menten. Para ello, se varía
!a concentración de la urea con respecto a la ureasa, posteriormente, las
soluciones se incuban durante un tiempo determinado, a! cabo de! cual
se proceden a titular con He! de concentración conocida. Así, a partir de la
cantidad de urea hidrolizada y el tiempo de reacción se calcula la velocidad de
la hidrólisis en rnicromol/minuto.
CINÉTICA DE MICHAELIS-MENTEN
El efecto de la variación de la concentración del sustrato sobre !a
velocidad do una reacción enzimática puede describirse gráficamente
así:
Universidad Nacional Abierta y a Distancia-UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA
Programas: Zootecnia , Agronòmica e Ingeniería Agroforestal-IA
Laboratorio de Bioquímica Metabólica-BM
Prof: Jairo Granados.,MSc
Cinética Enzimática de
la ureasa
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Gráfica 2.Curva cinética de Michaelis Menten
La cual indica, que a bajos concentraciones de sustrato, la velocidad
de la reacción varía directamente proporcional a este, comportándose
como una cinética de primer orden. A medida que se incrementa el
sustrato, los centros activos de la enzima se saturan y por lo
consiguiente se establece un límite de velocidades denominada
velocidad máxima (Vmáx), que representa una cinética de orden cero
puesto que es constante.
Un parámetro útil en este análisis, lo constituye una constante denominada de
michaelis (Km), la cual está relacionadas con la concentración del sustrato en el
cual la velocidad es la mitad de la velocidad máxima. La ecuación de la hipérbola
anterior
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