IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVO Y GRAM NEGATIVO A TRAVEZ DE LA UTILIZACION DE DIFERENTES METODOS DE CULTIVO

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UNIVERSIDAD DE LAS AMÉRICAS

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y AGRONOMIA

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVO Y GRAM NEGATIVO A TRAVEZ DE LA UTILIZACION DE DIFERENTES METODOS DE CULTIVO

Docentes: Lidia Bascuñán

Lorena Lemus

Estudiantes: Fernanda Alcapio

Diego Iturrieta

Javiera Muñoz

Asignatura: Microbiología

Curso: CBI319-122

NRC: 8047

IDENTIFICACION BACTERIANA

Para realizar una identificación bacteriana podemos utilizar diferentes medios, ya sea ver diferencias morfológicas, bioquímicas y tintoriales. A pesar de los diferentes métodos de diferenciación estos no siempre son 100% acertados, por lo que se necesita hacer un estudio morfológico de estos y ver cómo reaccionan en diferentes ambientes, ya que dependiendo de su reacción estos tienden a diferenciarse gracias a sus reacciones metabólicas, tales como las acciones enzimáticas, metabolitos o productos desechos

 Las bacterias modifican el medio en el que viven captando sustancias necesarias para su desarrollo y reproducción, cada uno de estos dependiendo del tipo de bacteria utilizada, asi podemos lograr la identificación bacteriana, según cambios fisiológicos.

Identificación de Gram positivo

(Streptococcus y Staphylococcus)

• Prueba de catalasa

Método utilizado para la detección de la enzima, la cual se encarga de descomponer el peróxido de hidrogeno en agua y oxígeno y así poder realizar la diferenciación e identificación de estas bacterias (Streptococcus y Staphylococcus).

• Materiales:

• Portaobjetos y agua oxigenada
• Bateria tinción de Gram

• Procedimiento:

1. Coloque una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos.
2. Con un asa de siembra previamente estéril, tome un inoculo de su muestra Gram positiva.
3. Si observa un burbujeo la prueba es positiva.

• Discusión:

El principio de esta prueba es que la enzima catalasa reacciona con peróxido de hidrógeno para formar agua y oxigeno.

La catalasa cumple una función protectora contra determinados microorganismos patógenos sobre todo anaerobios. El peróxido de hidrógeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos organismos, como tiene un alto potencial de toxicidad este es transformado por la enzima catalasa. Como resultado de esta prueba tenemos que la catalasa dio positivo a la bacteria de staphylococcus, ya que se produjo una reacción burbujeante lo que indica la formación de oxígeno y presencia de la enzima.

• Prueba de Hemolisis

Hay microorganismos que son capaces de crecer en agar sangre, cuando lo hacen responden de manera diferente pudiendo realizar lisis en los glóbulos rojos (hemolisis) producida por una enzima llamada hemolisina. Tenemos 3 tipos de hemolisis:

1. Hemolisis α: Es una hemolisis incompleta que crea un color verdoso alrededor de las colonias; las bacterias α-hemolíticas (S. viridans y S. pneumoniae) atacan eritrocitos y descomponen la hemoglobina, pero aun así no producen la enzima hemolisina, el color verde resulta por la reducción de la hemoglobina.
2. Hemólisis β: Es una hemolisis completa, esta decolora la zona alrededor de la colonia, las bacterias que muestran este comportamiento producen estreptolisina (S. pyogenes y agalactiae) que lisan todos los eritrocitos, esta hemolisis descompone completamente la hemoglobina.
3. Hemólisis γ: Este término expresa la ausencia de hemolisis.

• Procedimiento

1. Divida en 2 su placa de agar sangre
2. Prepare una dilución de su muestra, siembre con torula estéril a modo de tapiz en cada mitad de la placa.
3. Disponga disco de Bacitracina y Optoquina en cada cuarto (post- incubación observe halo de inhibición)  
4. Rotule e Incube a 37°C por 24H.

• Discusión:

• Sensibilidad a antibióticos:

En el laboratorio se utilizaron diferentes antibióticos en forma de sensidisco para poder identificar la sensibilidad de diferentes cepas bacterianas.

1. Bacitracina: Es una prueba utilizada para la diferenciación de estreptococos beta hemolíticos del grupo A de otros estreptococos beta hemolíticos; es un antibiótico que inhibe la síntesis de la pared celular bacteriana, la concentración que se encuentra en los discos inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolíticos del grupo A, pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos.
2. Optoquina: Es una pruena que permite diferenciar Streptococcus pneumoniae (sensible) de Streptococcus viridans (resistente).
3. Novobiocina: Es un antibiótico natural descubierto en 1956, formado por un actino bacteria Streptomyces niveus, siendo un inhibidor de girasa ADN, se le reconocen varios tipos de mecanismo de acción. Permite diferenciar Staphylococcus saprophiticus que es resistente, de Staphylococcus epidermidis.

• Procedimiento:

Bacitracina: Con una pinza se sacaron dos discos del antibiótico y se pusieron en la placa de agar sangre, un disco en cada mitad, en diferentes cepas.

Optoquina: Con una pinza se sacaron dos discos del antibiótico y se pusieron en la placa de agar sangre, un disco en cada mitad, en diferentes cepas.

Novobiocina: Con una pinza se sacaron dos discos del antibiótico y se pusieron en la placa agar manitol-sal, un disco en cada mitad, en diferentes cepas.

• Discusión:

• Agar Manitol-sal:

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial, es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos. Este medio también puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio.

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