Laboratorio Validación de Metodología Analítica

Laboratorio

Validación de Metodología Analítica

Validación de una Técnica Analítica

I. Objetivos

• Revisar y aplicar los conceptos de una validación analítica.
• Revisar y utilizar los parámetros que se deben medir en una validación analítica.

II. Definiciones y procedimientos

1. Selectividad

La selectividad es la capacidad de un método analítico para medir e identificar en forma separada o simultánea los analitos de interés en presencia de otras sustancias químicas que pueden o no estar formando parte de la matriz de la muestra.

1a. Procedimiento:

1. Preparar una solución estándar del analito en estudio según lo indicado en el método de análisis a validar.

2. Preparar un blanco de excipientes contenidos en el producto terminado y tratarlo igual que una muestra según el método en estudio.

3. Tanto el estándar como el blanco se determinan en triplicado.

1b. Evaluación:

La selectividad queda demostrada al no existir repuesta con la muestra de excipientes en comparación con el estándar.

2. Exactitud

La exactitud de un método analítico es la cercanía existente entre los valores obtenidos con el método y el valor real. La exactitud debe evaluarse en todo el rango de trabajo.

2a.Procedimiento:

1. Se elabora una mezcla homogénea de los excipientes que contiene el producto sobre el cual se va a aplicar el método. Con esta mezcla se preparan separadamente las muestras, a las cuales se agrega en forma exacta 70, 85, 100 y 130 % del valor declarado del analito en estudio.

También es posible agregar dosis volumétricamente, siempre que se utilicen solventes especificados en la monografía.

2. De cada nivel de concentración se deben preparar tres muestras, siguiendo las instrucciones detalladas en el método desde el comienzo de preparación de la muestra.

2b. Evaluación:

La exactitud se evalúa como porcentaje de recuperación del analito en las muestras con respecto a la cantidad teórica agregada. Este parámetro debe encontrarse dentro de un determinado nivel de confianza para aprobar el uso de una determinada técnica analítica.

3. Precisión

Se define como el grado de acuerdo entre los resultados individuales obtenidos con un determinado método. Se expresa generalmente como desviación estándar o desviación estándar relativa (coeficiente de variación).

La precisión puede ser una medida del grado de reproducibilidad o repetibilidad bajo condiciones de operación normales. La repetibilidad es la capacidad del método de generar resultados consistentes al aplicarse por un mismo analista, en un mismo equipo y laboratorio, en un corto período de tiempo. En contraste, la reproducibilidad involucra la capacidad del método de generar resultados consistentes si lo realizan distintos analistas de distintos laboratorios, con equipos diferentes y un mayor período de tiempo.

3a. Procedimiento:

Idéntico al señalado en la sección 2a

3b. Evaluación:

La precisión se evalúa de acuerdo a la desviación estándar o el coeficiente de variación obtenidos para el grupo de muestras analizadas.

4. Límite de cuantificación

Es la mínima cantidad de analito en la muestra que se puede determinar cuantitativamente a un grado definido de precisión y exactitud aceptable en las condiciones de trabajo del método. Es posible determinarlo por diferentes medios según el caso:

4a.1. Método basado en el examen visual

Para métodos instrumentales o no instrumentales en los que no se tiene señal numérica, se determina analizando muestras  con  concentraciones conocidas  y  decrecientes  de  analito  y estableciendo la mínima concentración en la cual el analito puede ser cuantificado con exactitud y precisión aceptables.

4a.2. Método basado en la relación señal-ruido

Este método requiere que el procedimiento de análisis sea instrumental y que proporcione una señal blanco, un ruido de fondo o una señal base, es decir, una señal residual a concentración cero de analito. Con dicho parámetro, es posible calcular el límite de cuantificación según la siguiente ecuación:

                                       LC = 10*R*N

LC: límite de cuantificación

10: factor determinado por test estadístico Style

N: ruido basal del instrumento

R: factor de respuesta (se obtiene de la curva de calibración)

4a.3. Método basado en la desviación estándar de la respuesta del blanco y de la pendiente de la recta de calibración

El límite de cuantificación se expresa como:

                                     LC = 10*ds/b

LC: límite de cuantificación

ds: desviación estándar de la respuesta

b: pendiente de la curva de calibración

La desviación estándar de la respuesta se determina con una curva de calibración especial que contiene muestras del analito en el rango del LC. Pueden usarse para este efecto la desviación estándar residual de una curva de regresión o la desviación estándar del intercepto en el eje Y de la curva de regresión.

4b. Evaluación:

Se informa el valor encontrado para el LC y su método de obtención. El LC estimado debe validarse analizando independientemente 5 muestras preparadas con valores en el límite de cuantificación o muy cercanos a él.

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