Laboratorio de biotecnología industrial Práctica N°8

[pic 1]UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA[pic 2]

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

PRÁCTICA N°8

CRUVA DE CRECIMIENTO

-INTEGRANTES:

        Dayana Borja

        Ingrid Carrera

        Jazmín Guadamud

        Tatiana Pila

        Nicole Plaza M

        Fernanda Ramos

-AYUDANTE: Francisco González-Valerio

-PROFESOR: Ing. Pablo Araujo

QUITO-ECUADOR

2019-2019

RESUMEN

Determinación de la curva de crecimiento microbiano de un microorganismo  mediante  el  uso  de  un  espectrofotómetro  así como  la  obtención  del  tiempo  generacional;  para  lo  cual  en primera instancia se preparó el cultivo del microorganismo a una temperatura determinada y luego se procedió a tomar alícuotas de la muestra para introducirlas en el espectrofotómetro cada cierto intervalo de tiempo, con lo cual se obtuvo valores de absorbancia que a través de cálculos matemáticos permitieron determinar el tiempo generacional y la concentración de la muestra, así se concluyó que la cantidad del tiempo de crecimiento de un microorganismo está regido por la turbidez de la muestra ya que ésta al aumentar o disminuir la absorbancia de la muestra lo hace conjuntamente.

PALABRAS CLAVES: CURVA_DE_CRECIMIENTO / TIEMPO_GENERACIONAL / ABSORBANCIA / ESPECTROFOTÓMETRO

PRÁCTICA N°8

CURVA DE CRECIMIENTO

1. OBJETIVOS

1.1.     Determinar la curva de crecimiento microbiano con el uso del espectrofotómetro.

1.2.     Determinar el tiempo generacional

2. TEORÍA

1.1.     Tiempo generacional

“Es el tiempo que tarda una población en duplicarse. Los tiempos de generación varían ampliamente entre los microorganismos, algunos crecen rápidamente con tiempos de generación de 30 minutos y otros de varias horas o incluso días.  Esto depende de: especie,  cepa,  medio  de  cultivo  utilizado  y  condiciones  de  incubación”.  [CITATION Ped08 \l 3082 ]

1.2.     Curva de crecimiento microbiano

Es la representación gráfica del logaritmo del número de células frente al tiempo.

Figura 1. Curva de crecimiento bacteriano[pic 3][pic 4]

Fuente: Briceño K. ¿Qué es la Curva de Crecimiento Bacteriano? (2013).

La curva comprende:

        Fase de latencia: período de adaptación de un microorganismo a un nuevo medio de cultivo.

        Fase exponencial o logarítmica: aumento regular de la población que se duplica a intervalos regulares de tiempo (G).

        Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por acumulación de productos tóxicos, etc.

        Fase de declinación o muerte: el número de células que mueren es mayor que el número de células que se dividen. [CITATION Mat00 \l 3082 ]

1.3.     Espectrofotómetro

“Es un instrumento que se emplea para medir la cantidad de intensidad de luz absorbida después de pasar a través de una solución muestra, en función de la longitud de la onda, también para la cuantificación de una sustancia y microorganismo. Este aparato tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de muestra y luego realizar la medición para determina la cantidad de luz que fue absorbida por la muestra”[ CITATION Pom16 \l 3082 ].

1.4.     Curva de Mcfarland

“Los estándares  de  turbidez  de  McFarland se  usan  como  referencia  en  suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectrofotómetros”[ CITATION Gar13 \l 3082 ].

1.5.     Ley de Lambert – Beer

“Es una relación empírica que relaciona la absorbancia que es directamente proporcional a la concentración de las especies absorbentes, c, y a la longitud de la trayectoria, b, del

medio absorbente, como se expresa en la ecuación”.

[ CITATION Sko15 \l 3082 ]

A =log ( Po

=abc                                            (1)

p )

3. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Material y Equipos

        Espectrofotómetro.

        Lámpara de alcohol

        Incubadora

        Tubos de ensayo

        Jeringuillas de insulina

3.2. Sustancias y reactivos

        Medios de Cultivo.

        Microorganismo activado.

        Agua peptonada

3.3. Procedimiento

3.3.1.   Activar el microorganismo a utilizar (E. coli)

3.3.2.   Sembrar en un medio de cultivo adecuado.

3.3.3.   Preparar 8 tubos de ensayo con agua peptonada.

3.3.4.   Inocular cada tubo con la misma cantidad de muestra.

3.3.5.   Incubar todos los tubos a 37°C.

3.3.6.   Estandarizar los tubos a una concentración de 1 x 10 5 ufc/ml

3.3.7.   Dejar un tubo control del mismo medio, sin inocular y guárdelo en el refrigerador, servirá para ajustar el espectrofotómetro a 100% de transmitancia y una longitud de onda de 620nm

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