PRACTICA 1. BIOSEGURIDAD Y PREPARACION DE REACTIVOS
Enviado por gloria doris loayza benacho • 17 de Julio de 2019 • Apuntes • 16.692 Palabras (67 Páginas) • 204 Visitas
Acrónimos
La siguiente lista provee una serie de abreviaturas cuyo significado es importante para el desarrollo de su formación médica.
[Agradecimiento a futurelearn]
Abbreviafions | Meaning |
ABL | Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1 |
Array CGH | Array Comparafive Genomic Hybridizafion |
BCR | Breakpoint cluster region |
BRCA1 gene | Breast cancer 1, early onset gene |
BRCA2 gene | Breast cancer 2, early onset gene |
CML | Chronic myelogenous leukaemia |
CNV | Copy number variafion |
DDD | Deciphering Developmental Disorders |
DNA | Deoxyribonucleic acid |
DS | Down syndrome |
GWAS | Genome Wide Associated Studies |
HD | Hunfingdon’s Disease |
MED | Mulfiple epiphyseal dysplasia |
Mrna | Messenger RNA |
NGS | Next generafion sequencing |
PGD | Pre-implantafion genefic diagnosis |
RNA | Ribonucleic acid |
SNPs | Single nucleofide polymorphisms |
TPMT | Thiopurine S-methyltransferase |
Trna | Transfer RNA |
VUS | Variant of uncertain significance |
WES | Whole exome sequencing |
WGS | Whole genome sequencing |
PRACTICA 1.
BIOSEGURIDAD Y PREPARACION DE REACTIVOS
INTRODUCCION
Los ácidos nucleicos, tienen entre otras las siguientes propiedades fisicoquímicas que nos permitirán extraerlos, purificarlos e identificarlos:
La Absorción de luz: La presencia de Bases Nitrogenadas permiten una absorción en el espectro UV con un pico máximo a 260 nm de longitud de onda.
Propiedad Acido-básica: En solución acuosa los grupos fosfato liberaran H+, lo cual determina un pH acido del medio y una carga negativa del radical fosfato el cual dentro de la célula conforma complejo con iones Mg2+, histonas, poliaminas, etc.
Las bases Nitrogenadas tienen grupos ionizables y en el caso del DNA en la doble hélice algunos de los grupos ionizable participan en la conformación de enlaces de hidrogeno entre las bases. El DNA es estable gracias a estos enlaces entre los pH 4 a 11.
Solubilidad:
Tanto el DNA como el RNA son solubles en soluciones salinas diluidas, como cloruro de sodio 0,015M.
El DNA cuando se encuentra en forma de complejos nucleoproteicos también es soluble en cloruro de sodio NaCl en rangos de 1 a 2 M, mientras que las proteínas precipitan a concentraciones altas de sal, lo cual permitirá la separación en el proceso de extracción de los ácidos nucleicos.
Las nucleoproteínas son insolubles a 0,14M de concentración de NaCl.
El alcohol etílico grado absoluto, precipita tanto el DNA como el RNA, en tanto que el isopropanol precipita selectivamente al DNA.
Viscosidad: El DNA tiene estructura fibrilar, la doble hélice es rígida o inmensamente larga en relación a su diámetro, debido a ello las soluciones del DNA son altamente viscosas. El proceso de desnaturalización se suele observar por la pérdida de viscosidad.
Desnaturalización del DNA: El proceso de desnaturalización consiste en la
separación de las dos cadenas por rompimiento principalmente de los enlaces hidrogeno que unen las bases complementarias y los otros tipos de uniones que mantienen unidas a los pares de bases, dicha separación puede ser completa o parcial. Dentro de los agentes que son desnaturalizantes están pH muy acido o muy alcalino, calor, detergentes, soluciones de baja fuerza iónica, tratamiento del DNA con urea y diversas amidas, etc.
Extracción de ácidos nucleicos
Dentro de los agentes extractores de las nucleoproteínas se incluyen: el agua, alcoholes diluidos, soluciones de NaCl y buffers de rango de 4 a 11 de pH. En cada caso, la extracción es seguida de precipitación por sulfato de amonio saturado o cloruro de calcio diluido, los ácidos nucleicos pueden ser obtenidos por digestión de las proteínas con enzimas proteolíticas o por remoción de las proteínas por desnaturalización. Sin embargo, esta última puede alterar a los ácidos nucleicos. Los iones divalentes como el Mg2+, activan a la DNasa, por tal motivo se emplea el citrato para evitar la hidrólisis enzimática y pH 8 el cual es incompatible con su actividad biológica
El SDS actúa sobre las proteínas por tanto desnaturaliza a la DNasa, actúa también sobre los lípidos disminuyendo su tensión superficial y permitiendo su solubilización.
Objetivo
- Organizar el equipo de trabajo, con un manual de medidas de bioseguridad.
- Preparación de Reactivos en soluciones stock y 10X, para extracción de Ácidos Nucléicos.
PROTOCOLO EXPERIMENTAL
PREPARAR LAS SIGUIENTES SOLUCIONES:
- NaCI 5M / 20 ml
- NaCl 0.15 M 10X / 20 ml.
- NaCl 0.15M más EDTA 0.1M pH 8.0, / 50 ml.
- SDS al 25%/ 10 ml.
- Solución salina-citrato (NaCl 0,015M y citrato de Na 0,0015M) /20 ml
- Cloroformo-alcohol isoamilico (24:1)v/v
- Alcohol efilico al 95% /50 ml.
REALICE LOS CALCULOS:
Luego de preparar las soluciones, envase, etiquete y conserve los reactivos, para emplearlos en
la próxima práctica. Recuerde averiguar,
las condiciones de conservación adecuadas.
Práctica 2.
El ADN, el código de la vida
INTRODUCCIÓN
¿Qué es el genoma?
Cada vez más los clínicos, científicos e incluso los medios de comunicación, están hablando sobre el genoma y el impacto de los datos genómicos, ahora y en el futuro, sobre la asistencia sanitaria.
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