PRACTICA No. 6 ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA

PRACTICA No. 6

ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA

OBJETIVO: Aprender a realizar una espermatobioscopia, conocer como está formado el líquido seminal, realizar e interpretar el recuento de espermatozoides, evaluar su morfología con niveles óptimos de calidad

INTRODUCCION: La espermatobioscopía directa se le conoce también como espermograma, espermiograma, espermatograma y seminograma, es un estudio que evalúa el semen humano en características físicas macroscópicas como el volumen, ph y características microscópicas como forma, movilidad y concentración de espermatozoides.

El semen es un líquido de color blanquecino, turbio, viscoso de olor característico que se produce en los testículos y que contiene principalmente espermatozoides suspendidos en un líquido llamado plasma seminal que contiene: líquido prostático, proteínas (espermina y células.

El espermatozoide es la célula reproductora sexual masculina, es una célula haploide por lo que solo contiene 23 cromosomas (1n), mide aproximadamente 50 um y está formado por tres regiones: cabeza, cuerpo o segmento intermedio y cola o flagelo.

a) La cabeza contiene el núcleo haploide cubierto por el acrosoma y un par de centriolos detrás del núcleo.

b) El segmento intermedio o cuerpo es una región que une la cabeza con la cola y que contiene la cantidad mitocondrial que provee la energía necesaria (ATP) para la movilidad del espermatozoide

c) La cola o flagelo le da movilidad al espermatozoide.

La cantidad de espermatozoides producida aumenta con la edad hasta un nivel máximo que depende de cada individuo y luego disminuye a medida que el varón envejece. No obstante se produce semen y espermatozoide durante toda la vida adulta del varón.

La espermatobioscopia se puede realizar en el laboratorio utilizando técnicas manuales y automatizadas. Este estudio es el más importante para evaluar la fertilidad masculina ya que el 40 % de las causas de infertilidad obedecen a alteraciones del factor masculino, también permite valorar el éxito de una vasectomía.

FUNDAMENTO:

pH

El pH debe ser medido dentro de una hora de la eyaculación. Se distribuye una gota de semen sobre el papel de pH (rango pH: 6,1 a 10,0 o 6,4 a 8,o), al cabo de 30 segundos el color de la zona impregnada debe ser uniforme y se compara con la cartilla de calibración para determinar el pH de la muestra. Todo tipo de papel de pH utilizado para este análisis debe ser controlado con estándares de pH conocidos. El valor normal esta entre 7,2 y 7,8. Valores de pH por encima de 7,8 hacen pensar en una infección o en una anormalidad de la función secretora de la próstata, en tanto los valores por debajo de 6,5 o 7,0 en una muestra sin espermatozoides (azoospermia), hacen pensar en una obstrucción de las vías eyaculatorias, en ausencia bilateral congénita de los vasos deferentes o en una anormalidad funcional de las vesículas seminales. A medida que transcurre el tiempo la muestra se va

alcalinizando por pérdidade anhídrido carbónico.

Licuefacción:

Para evaluar una muestra de semen esta debe estar licuada. Esto se consigue gracias a una sustancia liberada en el eyaculado denominada fibrinolisina. Esto ocurre aproximadamente a los 20 minutos de la eyaculación si la muestra está a temperatura ambiente. Si la licuefacción no se produce en este tiempo, puede indicar algún tipo de disfunción a nivel de la próstata. El eyaculado, de forma espontánea, se condensa al poco tiempo de ser expulsado. Gracias a esa sustancia (fibrinilisina) secretada por la próstata se consigue que se licue, pero puede darse el caso de que el semen no condense. Esto se debe a problemas de secreción de la vesícula seminal, que es la que contiene sustrato para que el eyaculado condense.

Morfología:

Para la observación microscópica de los espermatozoides se requiere de la tinción de Wright.

La tinción de wright cuyo colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color azul las partes acidas de las células) y eosina (que tiñe las partes alcalinas) disueltos en metanol (que permite la fijación de las células), adicionando a la preparación buffer de fosfatos (que rehidrata a las células después de la exposición con metanol)

Movilidad:

Es indispensable para que los espermatozoides puedan llegar a las trompas de Falopio y fertilizar el óvulo. Se valora el porcentaje de espermatozoides móviles, el de progresivos y el grado de movilidad.

El estudio de la movilidad de los espermatozoides es un parámetro muy importante en el espermiograma. Es necesario que los espermatozoides tengan una movilidad activa para que atraviesen el moco cervical y lleguen hasta el ovulo. Esta movilidad va a depender de factores intrínsecos para los espermatozoides.

La movilidad puede medirse mediante observación directa o con analizadores de imagen, es mucho más común la técnica de observación directa, para esto, se monta una gota de semen líquido o licuado entre porta y cubre con el portaobjeto precalentado a 37º y se observa microscópicamente.

Es conveniente juntar los bordes del cubre con vaselina para evitar la desecación. La movilidad se valora observando varios campos con el objetivo de 40x, contando por lo menos 200 espermatozoide por campo.

La movilidad se registra en % de espermatozoides móviles y en % de inmóviles.

Dentro de los epermatozoides móviles podemos distinguir 4 grados:

- Grado 0: cuando no se mueven en absoluto, inmóviles o movilidad nula.

- Grado 1: tienen un movimiento lento pero sin desplazamiento.

- Grado 2: tienen movimientos de vaivén o progresivos lentos y movimientos circulares.

- Grado 3: movimiento progresivo, rápido y rectilíneo.

La interpretación clínica de estos datos sería la siguente:

Un semen se consideraría normal cuando hay al menos de un 60 a 90% de formas móviles. Se denomina Astenospermia cuando hay menos del 50% de formas móviles y Necrospermia cuando todas las formas carecen de movilidad

MATERIAL Y REACTIVOS:

• Pipeta

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