PRACTICA

1.- Cite Y Explique las diferencias entre una preparación húmeda (Montaje húmedo) y una preparación seca (frotis).

PREPARACIONES PARA EXAMEN EN FRESCO.

 Entendemos por preparaciones en fresco sin modificar o simplemente preparaciones en fresco aquellas en las que la muestra se examina directamente, sin modificar o, como mucho, se diluye o concentra.

Presentan las ventajas siguientes:

 Algunos elementos que queremos observar (microorganismos, células humanas, cristales, etc.) se observan suficientemente bien en fresco, ya sea utilizando el microscopio de campo claro o el de contraste de fases.

 Permiten observar la movilidad de los microorganismos vivos, dato que en ocasiones tiene interés analítico.

 Algunas son preparaciones que se elaboran de forma rápida, simple y económica.

 Observación de determinados fenómenos microscópicos, tales como división celular (células animales, levaduras, etc.) o formación de esporas.

Sus inconvenientes son estos:

 No tienen validez universal: muchos microorganismos no son observables de este modo.

 Hay características interesantes de los microorganismos que no son observables de este modo.

PREPARACIONES PARA EXAMEN EN FRESCO LIGERAMENTE MODIFICADAS

 Nos referimos a preparaciones en fresco en las que a la muestra se le ha agregado una sustancia que facilita o mejora la observación de los microorganismos.

 Son principalmente montajes húmedos tratados con un solo colorante o reactivo. Suelen usarse colorantes, aunque no siempre es así.

Tinción vital.

 La tinción vital, también llamada tinción o coloración supravital, es un procedimiento intermedio entre el examen en fresco sin modificación y las técnicas de fijación seguida de tinción.

 Tiene por objeto poner de relieve detalles estructurales o de movilidad de los microorganismos que no es posible observar en fresco ni tras realizar modificaciones físicas y químicas profundas, como sucede con la fijación seguida de tinción.

 Se prepara del mismo modo que un montaje húmedo, pero antes de cubrir la gota de muestra con el cubreobjetos se agrega una gota de un colorante que no mate los microorganismos, se mezcla con el asa y se cubre con el cubreobjetos. Los microorganismos que nos interesa observar absorberán el colorante más que el medio y que los otros elementos formes (si el colorante está bien elegido).

 Al observarlos en campo claro absorberán más la luz y aparecerán coloreados más intensamente que otros elementos formes y que el medio que los rodea.

 Los colorantes usados suelen ser los mismos que se utilizan para las tinciones simples (se verán más adelante) aunque muy diluídos (diluciones de 1/10.000).

 Esto se hace porque los colorantes son tóxicos para las células. La superior dilución disminuye su toxicidad y esto permite observar microorganismos teñidos y vivos.

 No hay que olvidar, sin embargo, que la superior dilución del colorante no anulará su toxicidad; tan sólo retrasará la muerte de los microorganismos.

PREPARACIONES FIJADAS Y TEÑIDAS.

Para observar las características morfológicas de las bacterias y también de otras células las preparaciones fijadas y teñidas son las que se emplean con mayor frecuencia. Las ventajas de este

procedimiento son:

 Las células son más fácilmente visibles después de teñidas.  Pueden diferenciarse especies bacterianas diferentes mediante procedimientos de tinción diferencial.

Consideraciones al proceso de tinción

 En la tinción es imprescindible utilizar colorantes de alta calidad. La presencia de impurezas puede hacer que varíen las características del colorante y con ello las características de la tinción.

 También es relativamente frecuente que aparezcan partículas sólidas que se depositan sobre la extensión y son confundidas con gérmenes u otros elementos formes. Tanto a los colores anormales como a los elementos formes observados que no proceden de la muestra se les llama artefactos.

 Su concentración debe ser la adecuada. En algunos procedimientos es necesario calentar y en otros añadir reactivos adicionales, como el lugol en la tinción de Gram.

 Controlar el tiempo de tinción es fundamental. En general oscila entre 30 segundos y 10 minutos. Si nos pasamos la muestra se tiñe en exceso, y si el tiempo es insuficiente, no conseguiremos suficiente contraste

Tinción simple Los pasos esenciales son:

c) Obtener una extensión de la muestra: A esta extensión también se le llama frote, frotis o película. Debe ser suficientemente delgada y los más homogénea posible.

d) Fijar la extensión

e) Tinción: Que puede ser por inmersión o por vertido.

f) Lavado

g) Secado

Tinción diferencial

 Se llama así a los procedimientos de tinción que ponen de manifiesto diferencias entre distintas células, o bien entre las distintas partes de una célula.

 Estas diferencias pueden observarse gracias no sólo a diferencias de forma sino también de color. Habitualmente implican el uso de más de un colorante en etapas sucesivas.

Tinción de Gram.

2.- Mencione Cuales son los diferentes tipos de microscopios y describa sus principales diferencias.

• Microscopio corneal:

Un microscopio especialmente adaptado a una lámpara de hendidura para examinar la córnea in vivo e in situ.

• Microscopio de barrido:

Microscopio electrónico en el cual las radiaciones realizan un rastreo o barrido de la superficie de la muestra lo que ofrece una imagen en relieve de la misma.

• Microscopio de contraste de fases:

Microscopio óptico que, por las modificaciones de la fase de luz, debidas a la diferencia del índice de refracción, permite distinguir las estructuras de objetos incoloroso poco contrastados.

...