PRÁCTICA N° 6 Diagnóstico Coproparasitoscópico Mediato Directo y por Centrifugación Flotación

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Práctica No. 6 Diagnóstico Coproparasitoscópico Mediato Directo y por Centrifugación Flotación                                    

PRÁCTICA N° 6

Diagnóstico Coproparasitoscópico Mediato Directo y por

Centrifugación Flotación

INTRODUCCIÓN

El Coproparasitoscópico mediato directo es utilizado para examinar heces duras o pastosas. Se denomina mediato porque se examinan las heces horas después ya que en estas se pueden encontrar huevos de helmintos o quistes de protozoarios. Al no detectar presencia, de estos  pero se puede tener la sospecha de presencia de parásitos, se procede a realizar la técnica de concentración de parásitos por centrifugación.

Con la técnica por concentración y flotación  con Sulfato de Zinc, se aprovecha la densidad menor de los huevos y de quistes llevándolos a la parte superior del tubo de centrifuga, donde se recolectan en un cubreobjetos o con una pipeta Pasteur.

La densidad del sulfato de Zinc se ajusta a 1.18 para heces frescas y 1.20 para heces fijadas.

Objetivo general.- Desarrollar en el estudiante la habilidad de analizar microscópicamente muestras de heces para un examen parasitológico, capacitándolo para realizar un diagnóstico clínico.

Objetivo particular.- Desarrollar en el estudiante la habilidad de realizar los procedimientos recomendados para un diagnóstico por CPS mediato y la concentración de formas parásitas en muestras de heces.

MATERIAL PROPORCIONADO POR:

LABORATORIO                                        ALUMNO

1.- Lugol                                                 1.-Bata limpia

2.-Solución Salina 0.85%                                 2.-Guantes y cubre bocas

3.-Sulfato de Zinc                                         3.-Porta objetos y cubre objetos

4.-Microscopios                                         4.-Muestras positivas

5.-Aplicadores de madera

6.-Tubos

METODO

• Método del CPS mediato directo

Para el CPS mediato, colocar una gota de lugol con el gotero que sea pequeña, para que no flote la muestra. Colocar una pequeña cantidad de muestra de heces  y mezclar con un aplicador. Colocar el cubre objetos. Examinar la muestra a 10X, 40X, y si es necesario a 100X. El objetivo de 10X podemos detectar huevos de nematodos (Ascaris lumbricoides) cestodos (Taenia)        o tremátodos.

Si observó pocos parásitos la Técnica de  Flotación-Centrifugación le servirá  para concentración         de quistes y huevos de parásitos.

El material examinado y los sobrenadantes se colocarán en un recipiente que contenga formaldehído al 10 % para desinfectarlos.

Seguimiento:

1.- Depositar una muestra del tamaño de un frijol (0.3 g) EN UN TUBO DE 13 x100 cónico, de plástico, si tiene muchos detritos o partículas grandes, filtrar primero la muestra en gasa, antes de continuar. Si tiene mucho mucus no lo filtre agregar formol al 5 o al 10 % antes de continuar.

2.- Agregar  Solución salina 0.85% casi hasta la boca del tubo y mezclar con aplicador. Centrifugar a 2000-2500 rpm por 2 minutos y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que quede claro el sobrenadante (regularmente entre 7 a 10 veces).

3.- Agregar primero Sulfato de Zinc hasta la mitad del tubo y mezclar. Segundo, agregar más Sulfato de Zinc hasta 1cm debajo de la boca del tubo        .

4.- Centrifugar 2000-2500 rpm por 2 min.

5.- Al finalizar de centrifugar no deseche el  Sulfato de Zinc, agrega más con un gotero o  pipeta Pasteur, hasta formar un menisco.

6.-. Llévelo hasta una gradilla sin movimientos bruscos. Coloque un cubreobjetos en la parte superior del menisco sin moverlo y espere de 5-10 min.

7.- Prepare un portaobjetos con una gota de lugol, al terminar el tiempo levante con cuidado el cubreobjetos y colóquelo sobre  el portaobjetos en forma vertical con mucho cuidado sobre el lugol y posteriormente observarlo al microscopio.

RESULTADOS

Esquematice los protozoarios o helmintos que observo en forma directa  y por la técnica de flotación.

CUESTIONARIO

1.- Describa la utilidad de la técnica de centrifugación – flotación

La concentración de parásitos por flotación en muestras fecales permite comprobar la existencia de quistes de protozoos, huevos o larvas de helmintos, aun cuando estén presentes en pequeñas cantidades. Esta técnica se basa en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor, para hacer flotar objetos menos densos, como los huevos y quistes de parásitos, los cuales son colectados en la superficie del líquido y observados al microscopio. La técnica de concentración con sulfato de zinc proporciona una suspensión de parásitos muy limpia y es muy buena para la recuperación de quistes de protozoarios y de la mayoría de los huevos de helmintos. Aunque no es muy usada en forma rutinaria, por su sencillez se puede utilizarse en encuestas. El método de Faust, con ZnSO4, es uno de los más utilizados, aunque es poco eficaz para huevos pesados como los de Trematodos. Tampoco es muy efectivo para muestras de heces ricas en grasas. Este método puede realizarse en muestras recientes, refrigeradas o fijadas con formol (5% o 10%). Las técnicas de flotación permiten la separación de quistes de protozoos y huevos de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con elevada gravedad específica. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas técnicas los preparados son más limpios que los obtenidos por sedimentación. Los resultados se mejoran en la separación de los parásitos, basados en la diferencia del peso específico entre los huevos de helmintos, larvas y quistes de protozoos.

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