Precipitación, separación y determinación de pI de proteínas
Enviado por Aranza97 • 8 de Marzo de 2018 • Prácticas o problemas • 1.051 Palabras (5 Páginas) • 323 Visitas
Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Precipitación, separación y punto isoeléctrico de proteínas.
Laboratorio de bioquímica, QBP.
Hernández Arenas Aranza
4QV1-Sección 1
Objetivos.
- Analizar el efecto que produjo la modificación de factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteínas.
- Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, basándose en sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de pH.
Resultados.
Tabla 1.RESULTADOS DEL SALTING-OUT.
Biuret | Interpretación | |
Sobrenadante | + | Podemos deducir que hay presencia de proteínas con más de tres enlaces peptídicos que no precipitaron tras la centrifugación. |
Pastilla | + | De acuerdo a la coloración de la prueba de Biuret determinamos que también aquí encontramos proteínas con varios enlaces peptídicos, sin embargo éstas precipitaron tras la centrifugación. |
Filtrado | - | En este filtrado no se encontraron moléculas con más de tres enlaces peptídicos que fueran solubles en la solución saturada de sulfato de amonio. |
Residuo en el filtro | + | Aquí encontramos las moléculas que se precipitaron tras realizar el salting-out. Dichas moléculas eran polipéptidos con más de tres enlaces peptídicos. |
(+) Positivo para la prueba de Biuret, se observó una coloración violeta en el tubo. (-) Negativo para la prueba de Biuret, el reactivo permaneció azul al entrar en contacto con la solución.
Tabla 2. Precipitación por efecto del pH y solventes.
Tubo No. | 1 | 2 | 3 |
Clara de huevo filtrada dil 1:3 (ml) | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
HCL 0.1N(ml) | 1.0 | - | - |
NaOH 0.1N (ml) | - | 1.0 | - |
Regulador de acetatos 0.1M Ph 4(ml) | - | - | 1.0 |
Observaciones | El liquido se hizo turbio, aparencia casi lechosa | El liquído se hizo más translúcido | El líquido se hizo un poco más turbio, sin embargo no se volvió tan opaco como el primero |
Etanol 96° (ml) | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
Observaciones | Se observó un precipitado muy turbio en la superficie del tubo. | El precipitado observado era disperso y opaco | En éste caso el precipitado fue turbio y se encontró en la parte media del tubo. |
Tabla 3. Precipitación por metales pesados.
Tubo No. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Clara de huevo filtrada dil 1:3 (ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
HgCl2 5% (ml) | 0.25 | - | - | - | - | - |
AgNO3 2% (ml) | - | o.25 | - | - | - | - |
Pb(C2H3O2)2 5% (ml) | - | - | 0.25 | - | - | - |
BaCl2 5% (ml) | - | - | - | 0.25 | - | - |
NaCl 5% (ml) | - | - | - | - | 0.25 | - |
Agua (ml) | - | - | - | - | - | 0.25 |
Observaciones | Precipitado blanco. Turbidez (+) | Precipitado blanco. Turbidez (++) | Precipitado blanco. Turbidez (+++) | Líquido más claro (+) | Líquido más claro (+) | En éste tubo no se presentaron cambios. Su función es como tubo testigo. |
Las observaciones se realizaron en sistema de cruces donde (+) indica un menor grado de claridad o turbidez y (+++) representa el máximo grado de claridad o turbidez.
Tabla 4. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA INSULINA.
Tubo No. | CH3COOH 0.2M (ml) | CH3COONa 0.2M (ml) | Insulina 40U/ml | pH | Observaciones |
1 | 0.23 | 0.02 | 6U | 3.6 | + |
2 | 0.15 | 0.10 | 6U | 4.5 | ++ |
3 | 0.05 | 0.20 | 6U | 5.3 | +++ |
4 | 0.01 | 0.24 | 6U | 6.08 | - |
5 | 0.00 | 0.25 | 6U | 18.14 | - |
Las observaciones se realizaron en base a un sistema de cruces, donde (+) representa la mínima turbidez , (+++) la máxima turbidez y (-) representa una nula turbidez.
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