Precipitación, separación y Punto Isoeléctrico de proteínas.
Enviado por DonDann • 17 de Abril de 2017 • Informes • 1.029 Palabras (5 Páginas) • 2.422 Visitas
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]
Departamento de Bioquímica
Practica 2: Precipitación, separación y Punto Isoeléctrico de proteínas.
Elaborado por: Daniel Godínez Denis Iván y Luna Zagal Francisco Miguel. Sección 3, Grupo 4QM1
I. Introducción: La solubilidad de una proteína está influenciada por los siguientes factores: (a) su composición en aminoácidos (una proteína rica en aminoácidos polares es en general más soluble que una rica en aminoácidos hidrofóbicos); (b) su estructura tridimensional (las proteínas fibrosas son en general menos solubles que las globulares); (c) el entorno de la propia proteína. En este último sentido, podemos decir que los principales factores ambientales que influyen en la solubilidad de una proteína son los siguientes: (1) la temperatura; (2) la constante dieléctrica del medio; (3) el pH del mismo; y (4) la fuerza iónica; las proteínas requieren algo de sal para entrar en solución (fenómeno de “salting-in”) y son precipitadas por concentraciones relativamente elevadas de sales (fenómeno de “saltingout”). Los zwitteriones son un ejemplo de una especie isoeléctrica, la forma de una molécula que tiene un número igual de cargas positivas y negativas y, así, es neutral desde el punto de vista eléctrico. El pH isoeléctrico, también llamado pI, es el pH a la mitad entre valores de pKa para las ionizaciones a ambos lados de las especies isoeléctricas.
II. Objetivos: a) Analizar el efecto que produce la modificación de factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteinas. b) Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, basándose en sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de pH.
III. Resultados.
Resultados del Salting Out | ||
Biuret | Interpretación | |
Filtrado 1 | (+) | Existen aun proteínas solubles |
Precipitado 1 | (+) | Son las proteínas que se precipitaron con [] inicial de sales. |
Filtrado 2 | (+) | Se precipitaron las proteinas que eran solubles en el filtrado 1. |
Precipitado 2 | (-) | Se han precipitado todas las proteinas |
Tabla 1. Separación de proteínas por precipitación con sales.
Primera parte: Precipitación por efecto del pH. Se preparan los tubos como lo indica la tabla 2.
Tubo No. | 1 | 2 | 3 |
Clara de huevo filtrada. Dil 1:3 (ml) | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
HCl 0.1 N (mL) | 1.0 | (-) | (-) |
NaOH 0.1 N (mL) | (-) | 1.0 | (-) |
Regulador de acetatos 0.1 M pH 4.7 (mL) | (-) | (-) | 1.0 |
Observaciones. | Se observa ligeramente más opalescente. | Es evidente que aumenta la solubilidad Tornándose más clara. | Existe la presencia de un ligero precipitado. |
Tabla 2. Precipitación por efecto del pH
Segunda Parte: Precipitación por efecto de solventes. Utilizando los mismos tubos con los reactivos añadidos con anterioridad.
Tubo No. | 1 | 2 | 3 |
Etanol 96% | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
Observaciones. | Se distingue un precipitado de color blanco siendo muy evidente | Permanece claro, manteniendo así la alta solubilidad. | Incrementa abruptamente el precipitado que existía en la primera parte |
Tabla 3. Precipitación por efecto de solventes.
Tubo No. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Clara de huevo filtrada dil. 1:3 (mL) | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
Cloruro mercúrico 5% | 2 gotas | (-) | (-) | (-) | (-) |
Nitrato de plata 2% | (-) | 2 gotas | (-) | (-) | (-) |
Acetato de plomo 5% | (-) | 2 gotas | (-) | (-) | |
Cloruro de sodio 5% | (-) | (-) | (-) | 2 gotas | (-) |
Agua | (-) | (-) | (-) | (-) | 2 gotas |
Observación | Aparición de precipitado blanco | Precipitado blanco | Aparición de precipitado blanco | El tubo se observa claro/transparente | Es un control negativo |
Tabla 4. Precipitación por metales pesado
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