Práctica: Desnaturalización de proteínas
Enviado por shadiarobinson04 • 4 de Mayo de 2023 • Tareas • 3.007 Palabras (13 Páginas) • 57 Visitas
[pic 1] | UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA FACULTAD DE CIENCIAS LABORATORIO DE BIOQUÍMICA BÁSICA (1000043) FORMATO DE LABORATORIO |
PRÁCTICA: Desnaturalización de proteínas | |
DOCENTES: Adrian Gabriel Sandoval Hernandez | |
ESTUDIANTES: Angie Viviana Hernandez Cano Shadia Sofia Robinson Hernandez | GRUPO: 3 |
OBJETIVOS:
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CONTEXTO: Defina los siguientes conceptos:
Proteínas Las proteínas son biomoléculas formadas por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de proteínas, fósforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y serían, por tanto, los monómeros de unidad. Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídicos. La unión de un número superior a 50 aminoácidos se habla ya de proteína. Por tanto, las proteínas son cadenas de aminoácidos que se pliegan adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo miles de funciones. Las proteínas están codificadas en el material genético de cada organismo, donde se especifica su secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los ribosomas. | Estructura de proteínas La función de una proteína depende directamente de su estructura, sus interacciones con otras proteínas y su ubicación dentro de las células, los tejidos y los órganos. Estas se dividen en cuatro niveles de estructuras primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria y estás están constituidas por una secuencia de aminoácidos que componen la proteína y por cómo la proteína se pliega en formas más complejas. La estructura primaria viene definida por la secuencia de aminoácidos de la proteína. La estructura secundaria viene definida por las interacciones locales de tramos de la cadena polipeptídica, que pueden formar hélices alfas y láminas betas a través de interacciones de enlaces de hidrógeno. La estructura terciaria define la estructura tridimensional global de la proteína. La estructura cuaternaria define cómo múltiples subunidades proteicas interaccionan para formar complejos más grandes. |
Desnaturalización Consiste en la pérdida de la estructura terciaria, por rompimiento en los puentes que forman dicha estructura. Todas las proteínas desnaturalizadas tienen la misma conformación, muy abierta y con una interacción máxima con el disolvente, por lo que una proteína soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita. La desnaturalización se puede producir por cambios de temperatura, variaciones del pH, entre otros. En algunos casos, si las condiciones se restablecen, una proteína desnaturalizada puede volver a su anterior plegamiento o conformación, proceso que se denomina renaturalización. | Método de Biuret El Reactivo de Biuret consiste en cuantificar proteínas totales bajo un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm. |
DATOS Y CÁLCULOS: Complete las siguientes tablas utilizando fotos o dibujos y descripciones:
TABLA 1: Desnaturalización térmica | |
Muestra incubada a 37ºC por 5 minutos (M2) | Muestra incubada hasta ebullición (M3) |
[pic 2] Para esta muestra, se tuvo partida de una muestra inicial compuesta por 15 mL de clara de huevo diluida hasta 360 mL con NaCl 1% (P/V) (Muestra 1), de la cual se tomaron 4 mL y se incubaron durante 5 minutos a una temperatura de 37°C (temperatura del interior del cuerpo humano). En esta muestra no se observaron cambios significativos a simple vista, a excepción de la aparición de pequeñas burbujas en la superficie. Lo anterior sucede ya que el NaCl actúa como estabilizador de las proteínas, además de que esta temperatura no es lo suficientemente elevada para causar cambios estructurales importantes. | [pic 3] Esta muestra fue realizada de la misma manera que la muestra anterior (Muestra 2 - M2), pues consiste en 4 mL de muestra 1 (M1) sometida a una incubación de 5 minutos, pero a temperatura más elevada, es decir, 100°C mediante el método de introducción en agua en ebullición. De acuerdo a lo anterior, al someter a altas temperaturas esta muestra fue posible observar la desnaturalización masiva de las proteínas presentes en el medio, mediante la formación de una capa blanda delgada en la superficie del líquido situado en el tubo; además fue posible observar que la muestra se volvió más densa y con menor capacidad de fluidez, lo que permite deducir que es posible observar la separación de las proteínas en la solución gracias a la turbidez del medio. |
TABLA 2: Desnaturalización por pH extremo | |
Muestra desnaturalizada con HCl 1M | Muestra desnaturalizada con NaOH 1M |
[pic 4] En la siguiente muestra se desnaturaliza la clara de huevo con HCL. En un tubo de ensayo se colocó 3 ml de solución de clara de huevo y después de esto se le adiciono 0,5 ml de HCL. Al agregarle el ácido inmediatamente se hizo notorio un cambio de color en la solución, paso de estar transparente a tener un color ligeramente blanco medio turbio como se puede observar en la imagen, todo lo contrario a los otros dos tubos (seguian con un color transparente) uno de ellos contenia NaOH y el otro era el tubo contro, el cual era para notar los cambios y diferencias que se generaban al adicionarle acido o base a las otras 2 solucion de clara de huevo. Al mezclar la solución de clara de huevo con HCL, se hizo notorio en la solución el cambio de color inmediatamente, luego al esperar un minuto se hace notar un poco que la clara de huevo al tener contacto con el ácido se coagula y el liquido ligeramente blanco se va desapareciendo (en mayoria, no todo) ya que mientras se da la coagulación prácticamente se esta desnaturalizando la proteína. Este cambio en la solución se da porque el ácido que se agregó, redujo el ph en minoría de la clara de huevo volviéndolo un poco menos soluble. | [pic 5] En la muestra de desnaturalización por NaOH se realiza el mismo procedimiento al anterior, pero esta vez con 0,5 ml de NaOH. Esta muestra al agregar NaOH no mostró ningún cambio a simple vista, la solución quedó con el mismo color que tenía anteriormente, sin embargo el NaOH al ser una base y no un ácido como el HCL, aumenta el pH con lo cual se produce esta desnaturalización de las proteínas de la clara de huevo. |
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