REPORTE “OBTENCIÓN DEL GLUCÓGENO A PARTIR DEL HÍGADO DE RATA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA”

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA[pic 1][pic 2]

BIOQUIÍMICA GENERAL

REPORTE “OBTENCIÓN DEL GLUCÓGENO A PARTIR DEL HÍGADO DE RATA Y SU CARACTERIZACIÓN QUÍMICA”

PROFESOR: Ramiro García Guzmán

INTEGRANTES: Bernal Morales Héctor Enrique               4QV1

    Vallejo Vazquez Angel Alejandro.        Sección 3

• INTRODUCCIÓN

La Glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígeno de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). El glucógeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos en los animales, se encuentra en proporción mayor en el hígado (hasta 6%) y en el músculo, donde rara vez excede de 1%.

• OBJETIVO

Aplicar una estrategia para aislar, purificar y caracterizar el glucógeno.

• RESULTADOS

Se obtuvo el hígado de una rata, por disección, sacrificándola con éter tratando de no estresarla, debido a que si el organismo se estresa empieza a secretar adrenalina, hormona que pasa al torrente sanguíneo, y empieza a degradar el glucógeno, disminuyendo de esta manera el glucógeno.

Se obtuvo el peso del hígado, 5.3 g, y se cortó en pedazos muy pequeños. Posteriormente se incorporó a un mortero, colocado en hielo, y se le agregó 5.3 mL de ácido tricloroacético (TCA) al 10%, esto debido a que es 1mL/g de tejido hepático, y después 0.5 g de arena lavada, para aumentar la superficie de contacto y hacer que las células se rompan de manera más eficiente, y se prosiguió a triturar el hígado hasta tener una masa homogénea.

Se llevó a centrifugar, la masa homogénea, durante 5 minutos a 2000 rpm., Se decantó el sobrenadante, aquí se encuentra el glucógeno, a un vaso de precipitados de 250 mL y se mantuvo en hielo, esto para que la reacción del glucógeno con el TCA se detuviera. Lavamos el mortero y pistilo con 10 mL de TCA al 5% y este adicionarlo con la mezcla ya centrifugarla y homogeneizar, volver a centrifugar por 5 minutos a 2000 rpm.

Decantar el sobrenadante, donde se encuentra el glucógeno, y adicionarlo al vaso de precipitados. Añadimos 2 volúmenes de etanol al 96%, éste para que el glucógeno flocule ya que modifica la constante dieléctrica.

Se deshecho el sobrenadante, donde sólo se encontraba el etanol, y se colocó el glucógeno en una charolita que pesaba 1.5 que junto con el glucógeno pesaba 1.5822.

Se calculó el rendimiento de glucógeno. Se pesó 75 mg de glucógeno y se le agregó 15 mL de agua. De los 15 mL, de la solución, se tomó una cantidad de 0.5 mL en 6 tubos diferentes y se llevó a hidrolizar del tubo 1 al 4 a hidrolisis ácida, a los cuales se les incubo a 92°C y se les agregó un reactivo diferente, y del 5 al 7 se llevó a cabo hidrolisis enzimática, con amilasa salival incubando a 37 °C, ambas hidrolisis fueron a media hora.

En tres tubos diferentes se agregó 0.5 mL de la solución y se prosiguió a hacer las reacciones de Molish, Biuret y Ninhidrina, esto es para el glucógeno no hidrolizado. Pasado el tiempo de todos los hidrolizados se llevaron a cabo tres reacciones diferentes; Fehling, Lugol y Seliwanoff, de todos los tubos se obtuvo 0.5 mL y se anotaron las observaciones, de éste paso se agregó un tubo extra que funcionó como blanco.

TABLA 1. HIDROLISIS DEL GLUCÓGENO

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