Utilización de métodos para detención temprana con la relación del gen HLA-DR14 con la incidencia de Pénfigo vulgar a pacientes con riesgo hereditario

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA[pic 1]

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS

QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO

Utilización de métodos para detención temprana con la relación del gen HLA-DR14 con la incidencia de Pénfigo vulgar a pacientes con riesgo hereditario.

Abraham Osuna Pimentel

DESARROLLO INTEGRAL IV

DR. Aguilar Palazuelos Ernesto

Culiacán Sinaloa                                                                               Enero 2021

El trabajo realizado en Culiacán, Sinaloa. Trabajo realizado por Abraham Osuna Pimentel, 3º grado en la carrera de Químico Farmacéutico Biólogo, con la ayuda del DR. Aguilar Palazuelos Ernesto.

Agradecimiento

Con este trabajo quiero agradecer a mi familia, amigos y al DR. Aguilar Palazuelos por el apoyo para realizar esta tesis y tener su apoyo en todo momento.

INDICE

ÍNDICE DE TABLA:        v

ÍNDICE DE ILUSTRACIONES        vi

I Hipótesis        1

II Resumen        1

III Introducción        2

IV Revisión de literatura        3

A ¿Qué es el pénfigo vulgar?        3

B LOCALIZACIÓN Y ESTRUCTURA DEL GEN HLA-DRB1*0402        4

1 Mapa genético del sistema HLA. Región MHC.        4

C Metodología para detectar la presencia del gen.        6

Conclusión        10

Bibliografía        11

ÍNDICE DE TABLA:

Tabla 1 Principales grupos de genes del sistema MHC extendido en humanos. Se indica la distribución de los genes en las distintas regiones (A: clase I extendida, B: clase I, C: clase III, D: clase II, E: clase II extendida), así como el número de loci codificantes (dan lugar a proteínas funcionales) y no codificantes (pseudogenes y genes ARNt) de cada grupo (Horton et al., 2004).        6

ÍNDICE DE ILUSTRACIONES

Ilustración 1 Mapa genético de la región MHC extendida (7.6 Mb). El código de colores sirve para identificar las diferentes subregiones así como los distintos grupos de genes MHC, y si se trata de genes expresados, pseudogenes o transcritos (véase leyenda). Con letra de mayor tamaño se identifican los genes HLA de clase I y clase II clásicos (basado en el mapa genético original de Horton et al., 2004).        5

I Hipótesis

La presencia del alelo HLA-DRB1*0402 en el cromosoma 6, brazo corto en la región del CMH en pacientes de ascendencia judía o del medio oriente junto con descendientes directos de personas con la enfermedad pénfigo vulgar, tienden a ser más propenso a la enfermedad autoinmunitaria ya que dicho cromosoma es poco frecuente o nulo en la población normal y está relacionado a la enfermedad P.V.

II Resumen

Los pénfigos son un grupo de enfermedades ampollosas de piel y mucosas que histológicamente presentan ampollas intraepidérmicas por acantólisis y anticuerpos fijos y circulantes dirigidos contra la superficie celular de los queratinocitos. En pacientes mexicanos que padecen pénfigo, no se han determinado desequilibrios de presentación de antígenos del HLA, como se ha estudiado en otras poblaciones, por lo que se efectuó un estudio comparativo, prospectivo, transversal y observacional en 15 persona; 1 de ellos con pénfigo vulgar, 8 familiar cercanos y 6 personas que no son familiar, a quienes se les tomó muestra de sangre periférica para la extracción de DNA, con el método de expulsión salina ("salting out"). Se realizó determinación de HLA-DR, amplificando la región HLADRB1, mediante la técnica de reacción de polimerasa en cadena (PCR) y se determi-naron cada uno de los alelos con oligonucleótidos específicos de alelos (ASO), utilizando el kit Amplicor Hoffman La Roche Basilea, Suiza. Los resultados deberían de mostrar que el paciente con pénfigo vulgar debería de mostrar el resultado esperado con la expresión del gen y confirmar que se puede heredar de manera directa y corroborar si se presente en otros personas en las pruebas.

Summary

Pemphigus are a group of bullous skin and mucosal diseases that histologically present intraepidermal bullae due to acantholysis and fixed and circulating antibodies directed against the cell surface of keratinocytes. In Mexican patients suffering from pemphigus, HLA antigen presentation imbalances have not been determined, as has been studied in other populations, for which reason a comparative, prospective, cross-sectional and observational study was carried out in 15 people; 1 of them with pemphigus vulgaris, 8 close relatives and 6 people who are not relatives, from whom a peripheral blood sample was taken for DNA extraction, using the saline expulsion method ("salting out"). HLA-DR determination was carried out, amplifying the HLADRB1 region, by means of the polymerase chain reaction (PCR) technique and each allele was determined with allele-specific oligonucleotides (ASO), using the Amplicor Hoffman La kit. Roche Basel, Switzerland. The results should show that the patient with pemphigus vulgaris should show the expected result with the expression of the gene and confirm that it can be inherited directly and corroborate if it occurs in other people in the tests.

III Introducción

Los pénfigos representan un grupo de enfermedades crónicas de la piel y las mucosas, de fisiopatogenia autoinmune, que se caracterizan clínicamente por la presencia de ampollas intraepidérmicas cuyo mecanismo de formación es una pérdida de cohesión entre los queratinocitos epidérmicos conocido como acantolisis. (Sánchez-Estella, 2006). Las técnicas de detención del alelo HLA-DRB1*0402 que se utilizaran para revisar se harán en un porcentaje de pacientes con la padecimiento de PV y a un porcentaje de su familia para determinar la presencia de dicho alelo. (JIMENEZ THOMAS, 1998). La presencia de dicho alelo se podría utilizar para la detención temprana del padecimiento autoinmunitario con el cual se podrá hacer un mejor tratamiento temprano que se puede utilizar como método de prevención a personas con decendencia directa de dicho padecimiento.

La utilización de métodos como él tomó muestra de sangre periférica para la extracción de DNA, con el método de expulsión salina ("salting out"). Se realizó determinación de HLA-DR, amplificando la región HLADRB1, mediante la técnica de reacción de polimerasa en cadena (PCR) y se determinaron cada uno de los alelos con oligonucleótidos específicos de alelos (ASO), utilizando el kit Amplicor Hoffman-La Roche. (Sánchez-Estella, 2006). También se abordaran diferentes técnicas mayor facilidad de adquisición con el cual se podrá llegar a más personas y realizar pruebas a tiempo y tener mejor calidad de vida. Debido a las técnicas de detención que se utilizaran a personas con PV y a familiares directos se realizara el estudio con el cual se podrá refutar o aprobar la teoría que se plantea que alelo HLA-DRB1*0402 en el cromosoma 6 es el causante de dicha enfermedad con el cual se podrá realizar una mejor calidad de vida a personas.

Palabras claves: Pénfigo vulgar, Genética, Tratamiento, Medicamento, Riesgo para pacientes, Detención temprana

IV Revisión de literatura

Se revisaron diferentes fuentes como Google académico, Conacyt y biblioteca de la UNAM con las palabras pénfigo vulgar, antecedentes de pénfigo vulgar, marcadores genéticos y genética del pénfigo vulgar con el cual se encontró diferentes fuentes de trabajo.

A ¿Qué es el pénfigo vulgar?

El pénfigo es una enfermedad ampollosa autoinmune, rara, crónica y potencialmente fatal que afecta piel y las mucosas. Se caracteriza por la producción de autoanticuerpos dirigidos contra proteínas de adhesión intercelular de la superficie de los queratinocitos que se denominan desmogleínas, ocasionando acantolisis que se manifiesta por la aparición de ampollas intraepidermicas. (Marcano 2007)

Los factores genéticos juegan un papel importante, así como factores exógenos: fármacos, agentes físicos, virus, hormonas, alimentos, y estrés, tienen un efecto detonante.(Baroni 2007)

El PV es una enfermedad muy rara en contraer ya que se encuentra en categorías de enfermedades genéticas, autoinmunitarias con el cual es muy difícil de contraer solo que tengas un ancestro que tenga el padecimiento, en primera persona fui testigo de la enfermedad por parte de mi madre con el cual me dio una idea sobre este padecimiento, al presentar ulceras en el área de la boca, laringe y faringe con el cual pude presenciar la enfermedad ya que se presentó de forma espontánea con el cual en este ensayo redactare una técnica y posibles para detectar de forma temprana. En diferentes artículos se a demostrado que la presencia del alelo HLA-DRB1*0402 al realizar trabajos mediante la técnica de reacción de polimerasa en cadena (PCR) al tomar muestras de sangre del paciente con PV y descendencia del paciente mas también a familiares cercanos no directos con el cual se puede tener una corroboración del alelo con la enfermedad.

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