Citometria De Flujo

iado por m_pucciarelli

Ventajas e inconvenientes de la citometria de flujo

Estructura básica de un citómetro de flujo

Información obtenida por citometría de flujo

CARACTERISTICAS:

La CMF es una técnica sencilla que se aplica en la rutina diaria de muchos laboratorios clínicos y de investigación, capaz de proporcionar resultados de forma rápida que pueden ser aplicables al diagnostico. Gracias a su gran especificidad es capaz de distinguir entre varias diferentes, y detectar una población celular en una muestra en la que predominan otras poblaciones celulares mayoritarias. Pero la principal característica de la CMF es que puede ofrecer información simultánea de varios parámetros de cada una de las células analizadas y la relación entre los parámetros de una célula y los de otra célula también analizada. Permite el análisis de dos parámetros de dispersión, SSC/FSC y tres de fluorescencia (en equipos con un solo láser), Fl1, Fl2 y Fl3, y de una cuarta fluorescencia en equipos con dos láseres. (www.citometriadeflujo.com)

VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Debido a la necesidad de utilizar una suspensión de partículas (células, núcleos, cromosomas, etc), para ser leídos de una en una hace que se pierda información sobre la arquitectura de los tejidos que componen las células o de las propias células, así como la ineracción entre estas y el medio que las rodea (patrones nodulares o difusos de los linfomas). Frente a este inconveniente la CMF presenta múltiples ventajas frente al microscópio de fluorescencia y las técnicas citoquímicas, como:

- Posibilidad de empleo de multiples frente a un solo marcaje de la citoquímica y la microscopia de fluorescencia.

- Posibilidad de analizar un elevado número de partículas en un corto período de tiempo (5000 partículas/segundo).

- Posibilidad de cuantificar la por medio de los canales medios de fluorescencia.

- Mayor sensibilidad y objetividad que le permiten detectar enfermedad mínima residual y caracterizar poblaciones celulares poco abundantes en condiciones normales como los basófilos.

- Posibilidad de analizar poblacionescelulares y epitopos celulares. - Permite almacenar informáticamente la información del análisis para poderla utilizar en cualquier momento y reanalizar análisis hechos con anterioridad.

- Posibilidad de cuantificar las moléculas antigénicas presentes en un grupo celular. (www.citometriadeflujo.com)

ESTRUCTURA BÁSICA DE UN CITÓMETRO DE FLUJO

Esta compuesto por tres partes:

* SISTEMA FLUÍDRICO - Inyección de la muestra.

- Cámara de flujo.

* SISTEMA OPTICO - Fuentes de luz.

- Detectores

* SISTEMA ELECTRICO - Amplificador-convertidor.

- Sistema informatico

SISTEMA FLUÍDRICO: Este sistema consta de dos fluídos, uno que contiene en suspension a la muestra y otro que lo envuelve a fin de darle estabilidad (sheath fluid). Las células deben pasar una a una por delante del haz del láser. Ambos fluídos (Solución fisiológica, PBS, aire) no se mezclan porque circulan a diferente presión.

SISTEMA ÓPTICO: Este sistema se compone de dos tipos de ópticas:

La óptica de excitación, compuesta de el láser y las lentes apra enfocar y dirigir el haz de luz; y

La óptica de lectura, compuesta por las lentes de recolección de luz emitida luego de la interacción entre el haz del láser y las partículas y el sistema

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