Preparacion De Cultivos De Bacterias

AISLAMIENTO DE BACTERIAS Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

1.- PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad se pueden cultivar fuera de su hábitat normal, la mayoría de los microorganismos heterótrofos, en los medios de cultivo deben de estar presentes en forma razonable el carbono, nitrógeno, azufre, fosforo, calcio. Magnesio y hierro. Además de los oligoelementos como el manganeso, zinc , cobre, etc. Algunos de los microorganismos exigentes tiene la necesidad de factores de crecimiento como aminoácidos, vitaminas, purinas y pirimidinas y otras substancias que no pueden sintetizar ellos mismos.

Un medio de cultivo es un sustrato nutritivo solido o liquido, donde crecen y se multiplican los microorganismos en el laboratorio con el objeto de realizar su aislamiento para luego proceder a su identificación y estudios complementarios.

Los medios de cultivo deben de tener una concentración de iones hidrogeno en el rango neutro, además es imprescindible la temperatura de o a 15 grados c para los microorganismos psicrofilos, 20 a 42 grados para los mesofilos y de mas de 45 para los termófilos, así mismo la presencia de oxigeno o ausencia de oxígeno según sea el caso.

Hoy en día se dispone comercialmente de medios de cultivo deshidratados que son estables y se adaptan para el uso de laboratorio, solo hay que observar algunas recomendaciones básicas cuando se procede a su preparación.

MATERIALES

• Matraz erlenmeyer

• Balón de fondo plano

• Placas petri esterilizadas

• Tubos de ensayo esterilizados

• Probeta

• Balanza

• Espátula

• Trípode con malla de asbesto

• Mechero de bunsen

• Estufa de incubación

• Refrigeradora

PROCEDIMIENTO

 Calcular el peso en gramos del medio de cultivo correspondiente ejemplo: agar nutritivo 23 gramos para 1000ml, agar sangre 40 gr para 1000ml, agar muller hinton 24gr para 1000ml, agar champam 146.5 gr para 1000ml

 Pesar el medio de cultivo deshidratado en una balanza

 Vaciar la cantidad pesada en un balón de fondo plano o matraz erlenmeyer

 Medir el agua destilada con una probeta y añadir al medio

 Dejar reposar el medio de cultivo durante 5 a 10 min

 Ajustar el ph

 Esterilizar en autoclave a 121 grados durante 15 min

 Repartir los medios de cultivo en las placas petri o tubos de ensayo

 Realizar el control de esterilidad en la estufa a 37 grados por 24 horas

 Conservar los medios en la refrigeradora a una temperatura de -4 a -10 grados

2.- AISLAMIENTO DE BACTERIAS

Todo el aislamiento implica la dispersión o agotamiento de una muestra que contiene una flora mixta sobre la superficie de un medio solido. Con el asa de siembra o hisopo se va descargando gradualmente el inoculo mediante estrías, de tal manera que en los últimos planos del medio de cultivo queden depositadas pocas células aisladas, que en el ambiente nutricio se multiplican logarítmicamente hasta formar colonias puras aisladas en las cuales podemos estudiar sus características su morfología y afinidad tintoreal a la tinción de gran.

Realizaremos aislamiento de bacterias aerobias procedentes de la flora normal de nosotros mismos

MATERIALES

 Agar

 Estufa de incubación

 Etiquetas

 Baja lenguas

 Placas petri

 Hisopos

AGAR

gel coloidal formado por hidratos de carbono, de extendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas

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