Diagrama Microbiologia

Materiales y métodos

 Microbial Strain

 crecimiento USBA-018 (CMPU U018)

se cultivó Hungate  en tubos de 5 ml de una definidos sales basales medio BM)

que fue suplementado con 20 mM de D-glucosa, bajo una atm de N2:CO2 (80- 20), y se incubó a 65 C

 La sales de medio basal (gl ^-1) contenían 1,0 g de NH4-Cl; 0,3 g de K2HPO4; 03 g de KH2PO4 ; 10,0 g de NaCl ; 0,1 g de CaCl2.2H2O; 0,1 g de KCL; 0,5 g de cisteína- HCl. 1,0 g de extracto de levadura (YE); 1,0 ml de micronutrientes Balch y 1,0 ml de resazurina (Sigma) 0,1% (w / v).

 El pH de la BM se ajustó a 7,0 +- 0,1 usando 0,1 NaOH.

Antes del uso, cada tubo Hungate se inyectó con 0,05 ml de 2% (w / v)  Na2S.9H2O y 0,05 ml de 10% (w / v) de NaHCO3

La pureza de los cultivos utilizados en los experimentos se verificó mediante la confirmación de la presencia de una única morfología a través de la observación por el microscopio (50i Eclipse; Nikon) del crecimiento de los microorganismos BM suplementado con YE 2 gli y D- 20 mM glucosa.

 La gama de pH y la temperatura en la que la cepa creció 8, se evaluaron en BM suplementado con 2 YE gli y 20 mM de D-glucosa. Se evaluó pH entre 3,2 y 8,8 utilizando soluciones anaeróbicas de valores de NaHCO3, (10% w / v) y Na2CO3 (10% w / v). el intervalo de temperaturas en el que se evaluó esta cepa era 50-75

Evaluación de las fuentes de carbono y metabolitos finales de fermentación

Los siguientes sustratos se evaluaron a concentraciones de 20 mM: ácido succínico, glucosa, celobiosa, trehalosa, manosa, sacarosa, rafinosa, galactosa, glicerol, maltosa, xilosa, lactosa, fructosa y manitol.

También se evaluó la degradación de sustratos complejos. Ellos incluyen almidón, pectina y xilano que se evaluaron en 1% (w / v) de la concentración final.

En las evaluaciones, el BM se complementó con YE 1g.l^-1 y la tensión USBA-018 se cultivó dos veces seguidas en las condiciones experimentales descritas anteriormente. Cada vez, se usaron tres tubos de Hungate para la fermentación por lotes sin control de pH y sin agitación.

Evaluación de los efectos de las condiciones del cultivo sobre la formación de ácido láctico a partir de glucosa en diversas condiciones de cultivo BM

Varias condiciones podrían afectar la formación de ácido láctico en el BM como se ha descrito anteriormente se evaluaron.

En cada evaluación, la cepa USBA 018 se cultivó dos veces consecutivas en las mismas condiciones experimentales. Para cada cultivo, se utilizan tres tubos Hungate para la fermentación por lotes sin control de pH y sin agitación. Se inyectó a los tubos de Hungate que contienen BM y glucosa con 10% (v / v) de cultivo de siembra bacteriana en la fase de crecimiento exponencial como se determina por densidad óptica (DO) (ABS580nm: 0.4- 0.5 equivalente a 820 1025 microgramos biomasa seca ml medida con un espectrofotómetro DR 5000 con la incubación a 65 C.

El uso de la glucosa como fuente de carbono, se evaluaron las siguientes condiciones de cultivo:

(1) las variaciones del pH inicial del cultivo;

(2) las variaciones de las concentraciones iniciales de glucosa. Esto se hizo para determinar la concentración máxima tolerada por la cepa USBA-018 y la concentración que dio como resultado la producción de la mayor concentración de ácido láctico;

(3) diferentes concentraciones de fuentes de nitrógeno orgánico (extracto de levadura, peptona y tripticasa);

(4) una fuente de nitrógeno inorgánico (cloruro de amonio) con adición de vitaminas, y

(5) Adición de cloruro de manganeso.

Efectos de la adición de vitaminas, extracto de levadura y cloruro de amonio en la formación de ácido láctico

Los efectos de la adición de una mezcla de cinco vitaminas, extracto de levadura y cloruro de amonio fueron evaluados en un diseño factorial 2^3 (tres factores a dos niveles). Las vitaminas utilizadas fueron se añadidas a la BM a partir de soluciones filtradas estériles que habían sido preparados en condiciones anaeróbicas vitamina B1 (tiamina), vitamina B2 (riboflavina), vitamina B5 (ácido pantoténico), vitamina B6 (piridoxina) y vitamina H biotina) . Las vitaminas se añadieron a la máquina de soluciones filtradas estériles que han sido elaborados en condiciones anaeróbicas.

efectos de las variaciones de pH en la fermentación y los efectos de la adición de cloruro de manganeso en la formación de ácido láctico

 fermentaciones en lotes de pH controladas. Las fermentaciones se realizaron en tubos de Hungate utilizando BM con glucosa (40 mM) y las tres fuentes de nitrógeno organico evaluados previamente a concentraciones de 1,0 gl^-1. El objetivo fue identificar el efecto del control del pH sobre la formación de ácido láctico. Sobre la base de estos resultados, la adición de 0,1 gl^-1 de cloruro de manganeso utilizando sólo 1,0 g,l^-1 de YE como fuente de nitrógeno orgánico se evaluó posteriormente. El control del pH se consiguió mediante la adición de 0,1 ml de NaHCO3 (10% w / v) cada 12 horas para mantener el pH de la fermentación entre 5,5 y 7,0.

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