SECUENCIA DE DNA

UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

CENTRO UNIVERSITARIO DEL SUR.

División de salud y Bienestar.

MEDICO CIRUJANO Y PARTERO

Materia: Biología molecular

Profesora: Dra. María Pita López

Trabajo: FUNDAMENTO Y APLICACIONES DE LAS TECNICA SECUENCIACION DE ADN Y TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE.

Alumno: Alejandro Enrique Morales Miranda

14/05/13 

FUNDAMENTO Y APLICACIONES DE LAS TECNICA SECUENCIACION DE ADN Y TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE.

Fundamento AND recombinante:

Las secuencias de DNA recombinante contienen secuencias de DNA derivadas de una fuente.

Las endonucleasas de restricción reconocen secuencias cortas de nucleótidos en un DNA doble y dividen su columna central en sitios específicos en ambas cadenas de la doble hélice. Las secuencias que reconocen las enzimas de restricción miden de 4 a 6 nucleotidos.

La importancia de estas enzimas de restricción se debe a la frecuencia de que una secuencia de 4 a 6 nucleotidos se puede produccir por casualidad, cualquier DNA es suceptible a la fragmentación por estas enzimas, estas mismas permiten disecar el DNA del genoma, en un conjunto de fragmentos que por la electrforesis y su duración puede fraccionarse.

Los DNA recombinantes se pueden formar de distintas formas.

1. Las moléculas de DNA de 2 fuentes distintas se tratan con enzimas de restricción que hacen cortes escalonados en la cadena doble de DNA.

2. Los cortes dejan colas cortas de una cadena y que actúan al unirse con la cola complementaria de una cadena en otra molécula de DNA para restaurar una molécula de cadena doble.

3. Los plásmidos que forman la molécula recombinante son pequeñas moléculas circulares de DNA de doble cadena que se separan de un cromosoma bacteriano principal.

4. Los fragmentos de DNA y el plásmido se incuban juntos en presencia de la DNA ligasa.

5. Los 2 tipos de DNA se unen mediante enlaces de hidrogeno por sus extremos pegajosos (colas) para formar recombinantes de DNA.

Aplicaciones

• Terapia génica (insulina)

• Evolución. Estudio de las relaciones filogenéticas entre organismos (comparación de secuencias nt de genes universalmente conservados. Ej. ARNr 16S y 18S.)

• Medicina. Diagnóstico de enfermedades infecciosas y genéticas.

Secuenciación de DNA

Este procedimiento se inicia con una población de fragmentos de DNA idénticos hasta de casi 500 pares de bases de longitud obtenidos por tratamiento de DNA con una enzima restrictiva. La preparación se divide en cuatro muestras, cada una tratada de manera ligeramente distinta.

1. El DNA se desnaturaliza en sus cadenas simples.

2. Se incuba con un oligonucleótido corto marcado con radiactividad, complementario del extremo 3' de uno de los fragmentos de cadena simple

3. La mezcla de reacción también contiene una DNA polimerasa los cuatro precursores (dNTP) y un precursor modificado en baja concentración,

ddNTP. A cada una de las cuatro muestras se añade un ddNTP diferente (ddATP, ddCTP, ddTTP o ddGTP). Se incuban las mezclas de reacción en condiciones apropiadas, el oligonucleótido marcado se une a los extremos 3' de los fragmentos de cadena simple, sirven como iniciadores para la adición de nucleótidos en una cadena complementaria en crecimiento.

4. Los didesoxiribonucleótidos carecen de un grupo hidroxilo en las posiciones 2' y 3'; una vez incorporado uno de estos nucleótidos sobre el extremo de una cadena en crecimiento, la falta del 3' OH imposibilita a la polimerasa a añadir otro nucleótido, y por lo tanto concluye la cadena.

5. Cada una de las cuatro muestras contiene una población de fragmentos de DNA incompletos con marca radiactiva de diferente

...