Identificación de Biomoléculas

Identificación de Biomoléculas.

Introducción.

La presente práctica refiere al tema de biomoléculas, que son cualquier tipo de moléculas orgánicas producida por el hombre. También son estructuras a base de carbono y pueden ser sintetizadas por los seres vivos. En ésta práctica identificaremos la presencia de glucosa (C6H12O6), que es un compuesto formado por 6 átomos de carbono (hexosa); Almidón, un polisacárido de reserva energética predominante en las plantas constituido por la unión de grandes cantidades de monómeros de glucosa; Lípidos, un conjunto de compuestos principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida oxígeno, aunque también pueden contener fósforo, azufre y nitrógeno; Proteínas, en estas se encuentra un alto porcentaje de nitrógeno, así como de oxígeno, hidrógeno y carbono. En la mayor parte de ellas existe azufre, y en algunas fósforo y hierro.

Todo esto lo identificaremos a través de reactivos, tales como Fehling A y B, Sudan III, Biuret.

Reactivo de Fehling

El reactivo de Fehling, también conocido como Licor de Fehling, es una disolución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinación de azúcares reductores.

Sirve para demostrar la presencia de glusosa, así como para detectar derivados de ésta tales como la sacarosa o la fructosa. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:

• Sulfato de cobre cristalizado, 35 g y agua destilad hasta 1.000 mL.

• Sal de Seignette o Tartrato mixto de potasio y sodio 150 g, solución de hidróxido de sodio al 40 %, 3 g y agua hasta 1.000 mL.

Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso, para evitar la precipitación del hidróxido de cobre.

El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando un precipitado de color rojo.

La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo.

La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso.

Lugol

El lugol es una solución de yodo (1%) y yoduro de potasio (2%) en agua destilada. Este reactivo reacciona con algunos polisacáridos como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas, formando un complejo de inclusión termolábil que se caracteriza por ser colorido, dando color diferente según las ramificaciones que presente la molécula.

Sudán III

El reactivo Sudán III es utilizado fundamentalmente para detectar la presencia

de lípidos en una muestra, los cuales se colorean con dicho reactivo.

Esto se debe a que el compuesto Sudán III, por su baja polaridad, es más soluble en los lípidos que en el solvente utilizado para su disolución.

Biuret

El reactivo de Biuret se pretende utilizar para la determinación o identificación de proteínas, péptidos que presenten enlaces pepiticos(2 o mas) en una muestra . El criterio para determina si la muestra de estudio resulta positiva o negativa ,se debe a que el reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. por lo cual si la solución final nos da una coloración violeta , se refiere a que se ha detectado una presencia de proteínas o mejor dicho de enlaces peptídicos.

Problema.

Se busca saber si hay presencia de almidón, proteínas, glucosa y lípidos en la papa, jugo de naranja, yogurt, salchicha y leche.

Solución.

Nuestra hipótesis es, que todos los alimentos mencionados tendrán proteínas, glucosa y lípidos. Sólo la papa tendrá almidón.

Material.

Objetos de Laboratorio: • Microscopio óptico (1)

• Tubos de ensayo (6)

• Vaso de precipitado (250 ml.)

• Gradilla para tubos de ensayo (1)

• Pinza para tubos de ensayo (1)

• Agitador (1)

• Caja de Petri (1)

• Escobillón de cerda (1)

• Cubreobjetos (2)

• Gotero (1)

• Mechero de Bunsen (1)

• Soporte con anillo y tela de alambre(1)

• Probeta (10ml.) (1)

• Vidrio de reloj (1)

Alimentos: • Leche light (50 ml.)

• Jugo de naranja natural (50 ml.)

• Yogurt natural (50 ml.)

• Salchicha (50 gr.) * La salchicha fue licuada con aproximadamente 10 ml. de agua natural.

• Hígado de pollo (1)

• Huevo (1)

• Papa hervida (1)* La papa fue hervida, se utilizó el agua con la que se hirvió.

• Papa cruda (1)

• Jitomate(1)

Reactivos: • Fehling A y B

• Lugol

• Biuret

• Sudan III

Método.

1.-Se colocó la tela de alambre sobre el soporte con anillo.

2.- Se le agregaron 100ml de agua al vaso de precipitado y se puso a calentar.

3.- En la gradilla, se colocaron 5 tubos de ensayo. Se le agregaron 2ml de cada alimento (leche, jugo de naranja, yogurth, líquido de la salchicha y agua con la que se hirvió la papa) a los tubos.

A) Glucosa

4.- A cada tubo de ensayo (con los alimentos contenidos) se le agregaron 0.5ml de fehlig A y 0.5 ml de fehling B.

5.- Se mezclaron perfectamente los alimentos con los reactivos utilizando el agitador, el cual se enjuagó perfectamente cada que se cambió de alimento.

6.- Se pusieron los 5 tubos de ensayo en el agua que se estaba calentando (baño maría) y se dejaron 3min. Se observó si el color cambó de azul a amarillo o rojo

B) Almidón

4.- A cada tubo de ensayo (con los alimentos contenidos) se le agregaron 2 gotas de lugol.

5.- Se agitó cada tubo de ensayo para mezclarse perfectamente y se observaron los cambios de color.

6.-A la papa cruda se le hizo un corte muy delgado y se le agregó una gota de lugol, después se observó si había cambio de color.

C)Lípidos

4.- A cada tubo de ensayo (con los alimentos contenidos) se le agregaron 2ml de agua y se agitaron fuertemente para emulsionarlos.

5.- Se le agregaron 3 gotas de reactivo sudan III y se mezcló cada uno utilizando el agitador, el cual se enjuagó perfectamente al cambiar de alimento, y se observó si el color fue rojo.

D) Proteínas

4.- A cada tubo de ensayo (con los alimentos contenidos) se le agregó 1ml de reactivo biuret.

5.- Se mezcló cada uno con el agitador, el cual se enjuagó perfectamente al cambiar de alimento, y se observó si el color cambió a azul o violeta.

Resultados.

A)Glucosa:

Antes:

(De derecha a izquierda: Agua de salchicha, agua de papa, yogurt, leche, jugo de naranja)

Después:

(De derecha a izquierda: Agua de salchicha, agua de papa, yogurt, leche, jugo de naranja)

En el caso de la salchicha, se observa un cambio en la tonalidad del azul.

En al caso del agua de papa, se observa que pasa del color azul a naranja. Mientras que el yogurt, la leche y el jugo de naranja cambian a diferentes tonalidades de amarillo, como se observa en las imágenes.

B)Almidón:

Ninguno de los alimentos presentó cambios en el color.

B) Almidón.

La papa cruda presenta un cambio de color ante la presencia de lugol.

C) Lípidos.

No se observó ningún cambio de color.

D)Proteínas

(De derecha a izquierda: Jugo de naranja, no presentó cambios; leche, cambió a violeta; yogurt, cambió a lila; Papa cambió a azul; salchicha cambió a morado)

Análisis:

En el caso de la glucosa, se observó que ningún alimento tomó el color rojo que se esperaba, lo cual nos indica que ninguno de ellos contiene azúcares reductores. Sin embargo, en los casos del agua de papa, salchicha, leche, yogurt y jugo de naranja, se observaron cambios de color en la mezcla, lo que nos indica que sí hay presencia de glucosa y la variación de colores se debe a las diferentes ramificaciones que presenta la molécula.

En el caso del almidón, se observó que ni el agua de papa, de salchicha, ni la leche, yogurt y jugo de naranja, presentan almidón debido a que la mezcla no cambió de color. Por otro lado, en la papa cruda, se observó un cambio de color con la presencia del lugol, lo que nos indica que si contiene almidón la papa cruda, como se esperaba.

En el caso de los lípidos, se observó que ninguna mezcla presentó un cambio de color, lo que nos indica que, contrario a lo que se pensaba, no hay presencia de lípidos en ninguno de los alimentos.

En el caso de las proteínas, se observó que las mezclas de leche, yogurt y salchicha con el reactivo, se tornaron color violeta, esto confirma la presencia de proteínas como se había pensado, por el contrario, el jugo de naranja y el agua de papa no presentan ningún cambio, lo que niega la presencia de proteínas al contrario de lo que se pensaba.

Conclusión:

Se puede concluir que:

• Ninguno de los alimentos contenidos en los tubos de ensayo tienen almidón, ya que no reaccionó ante la presencia del reactivo lugol.

• La papa cruda sí contiene almidón, ya que si cambió su color ante la presencia de lugol.

• El agua de papa, salchicha,

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