METODO DE KJELDAHL PARA OBTENCION DE PROTEINAS

RESUMEN

En la práctica realizada en el laboratorio se utilizó el método de Kjeldahl, del cual buscamos obtener un resultado en porcentaje de proteínas que se encuentra en una muestra orgánica, en el caso nuestro trabajamos con el maíz, con esta muestra pudimos aplicar cálculos para la determinación del porcentaje tanto de cenizas como de humedad.

El investigador danés Johan Kjeldahl desarrolló en 1883 un método de análisis químico para determinar así la cantidad de nitrógeno en ciertos compuestos orgánicos. Esta técnica de análisis instrumental se le llamó el Método Kjeldahl en su honor, es uno de los métodos más usados para el estudio y análisis de proteínas mediante el análisis de nitrógeno orgánico.

Este método se usa comúnmente para estimar el contenido de proteínas de los alimentos; cuya técnica consta de tres etapas: 1. Digestión: Conversión del Nitrógeno (proveniente de las proteínas, por ejemplo) en ion amonio mediante calentamiento (a una temperatura de 400º C aproximadamente) en bloque de digestión con adición previa de ácido sulfúrico y catalizador (sulfato de cobre (II) ), que desencadenan la conversión del nitrógeno de la muestra en amonio.

2. Destilación: Separación por arrastre con vapor del amoníaco y posterior solubilización en una solución ácida de concentración conocida.

En esta etapa se adiciona NaOH a la disolución de amonio obtenida previamente, generándose NH3 y vapor de agua, que arrastra al mismo.

La solubilización posterior en la solución ácida permite la conversión de NH3 a catión amonio, el cual se encuentra junto con el exceso de solución ácida añadido.

El NH3 puede recogerse sobre dos medios: ácido fuerte en exceso de concentración conocida, o bien, ácido bórico en exceso medido.

3. Valoración: Medición de la cantidad de ácido neutralizado por el amoníaco disuelto, lo que indica la cantidad de Nitrógeno presente en la muestra inicial.

Según el medio de recogida en la destilación, el amonio se valora de dos formas:

Recogida sobre ácido fuerte en exceso medido: se emplea una base y el indicador rojo de metilo

Recogida sobre ácido bórico en exceso medido.

INTRODUCCION

Existe un número considerable de datos sobre la composición química del maíz y múltiples estudios han sido llevados a cabo para tratar de comprender y evaluar las repercusiones de la estructura genética del número relativamente elevado de variedades de maíz existentes en su composición química, así como la influencia de los factores ambientales y las prácticas agronómicas en los elementos constitutivos químicos y en el valor proteínico del grano y sus partes anatómicas. La composición química tras la elaboración para el consumo un aspecto importante del valor nutritivo y en ella influyen la estructura física del grano, factores genéticos y ambientales, la elaboración y otros eslabones de la cadena alimenticia. Las partes principales del grano de maíz difieren considerablemente en su composición química. La cubierta seminal o pericarpio se caracteriza por un elevado contenido de fibra cruda, aproximadamente el 87 por ciento, la que a su vez está formada fundamentalmente por hemicelulosa (67 por ciento), celulosa (23 por ciento) y lignina (0,1 por ciento) (Burga y Duensing, 1989). El endospermo, en cambio, contiene un nivel elevado de almidón (87 por ciento), aproximadamente 8 por ciento de proteínas y un contenido de grasas crudas relativamente bajo.

Se realizó el método de Kjeldahl para comprobar el porcentaje de proteínas y el nitrógeno presente en el maíz; En este método se digieren las proteínas y otros compuestos orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno orgánico total se convierte en sulfato de amonio mediante la digestión. La mezcla resultante se neutraliza con una base y se destila. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico. Los aniones de borato así formado se titulan con HCL estandarizado para determinar el nitrógeno contenido en la muestra. (selecta, 2005).

PROCEDIMIENTO

Primer procedimiento:

Haga una caja pequeña de papel aluminio, introduzca en ella 10 a 15 g de muestra biológica, pese con exactitud. Coloque el conjunto dentro de una estufa y caliente a 70 °C, durante 48 horas o hasta que el peso este constante.

Segundo procedimiento:

Digestión: En un balón Kjeldahl de 250 ml, limpio y seco agregue 200 mg de muestra biológica solida o 1 ml de muestra liquida, 500 mg de mezcla catalizadora y 5 ml de ácido sulfúrico concentrado. Procure que todos los reactivos lleguen al fondo del balón.

Colocar el balón en el digestor y caliente suevamente durante 15 minutos para evaporar el agua. Aumente la temperatura de tal forma que los vapores de ácido sulfúrico lleguen solo hasta la mitad del cuello del balón. Mantenga estas condiciones hasta que el contenido adquiera un tono verde amarillento. Deposite el contenido en el balón de destilación.

Destilación: Se puso a calentar el equipo de destilación. Una vez caliente se le agrego una mínima cantidad de hidróxido de sodio al 40% hasta que el balón torne un color oscuro, en el extremo del condensador se colocó un Erlenmeyer de 125 ml con 20 ml de ácido bórico al 4 % y tres gotas de indicador

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