Analisis Bacteriologico De Una Muestra De Agua Para Consumo Humano

Trabajo práctico n° 8

Análisis bacteriológico de una muestra de agua para consumo humano

Carrera: Licenciatura en Ciencia y Tecnología de los Alimentos

Catedra: Microbiologia de Alimentos

Alumna: Fiorella Forte

Fecha de entrega: 18/junio/2013

Objetivos

 Conocer el procedimiento de extracción de una muestra de agua para análisis bacteriológico.

 Desarrollar la secuencia de pasos necesarios para determinar la aptitud bacteriológica de una muestra de agua para consumo humano según el Código Alimentario Argentino(CAA).

 Cuantificar las bacterias aerobias mesófilas totales.

 Cuantificar bacterias coliformes totales y termotolerantes.

 Identificar la presencia de Pseudomonas aeruginosa.

 Identificar la presencia de Escherichia coli.

Introducción

El agua interviene en nuestra alimentación, al ser ingerida directamente o como componente, en la preparación de alimentos. Además puede vehiculizar microorganismo peligrosos, por lo cual es necesario determinar su potabilidad.

Además de la utilización directa, el agua es utilizada para lavado de alimentos, preparación de hielo, lavado de material, enfriamiento para conservas, entre otras.

Entre los microorganismos patógenos para el hombre, que se transmiten por el agua, se incluyen las bacterias, virus y protozoos. Éstos se desarrollan en el intestino y abandonan el organismo en las heces. Estos patógenos se encuentran en general en muy bajas concentraciones en el agua, por lo que resulta difícil su aislamiento y cuantificación.

Para evaluar la presencia de estos patógenos, se utilizan microorganismos indicadores que se hayan siempre presentes y en grandes cantidades en las heces humanas y de animales de sangre caliente. Además, son de fácil detección y cuantificación, y su presencia en el agua implica que la misma ha recibo contaminación de origen fecal. El grupo de microorganismos más utilizado como indicador es el de los coliformes definidos como bacilos no esporulados, aerobios facultativos, gram negativos, fermentadores de la lactosa conformación de ácido y gas a 35-37 °C en 48 hs. Agrupación de carácter operativo y no taxonómico.

Desarrollo del trabajo practico:

Actividad N° 1: Extracción de una muestra de agua de red domiciliaria

 Limpiar superficialmente la boca de la canilla para eliminar cualquier suciedad.

 Abrir la canilla y dejar salir el agua durante dos o tres minutos. Cerrar la canilla.

 Flamear la canilla durante un par de minutos para esterilizarla, con la llama de un hisopo de algodón embebido en alcohol.

 Abrir con cuidado la canilla y dejar salir el agua en forma moderada.

 Tomar el frasco estéril y llenar las ¾ partes del mismo (no menor 100) y tapar inmediatamente. En caso de tratarse con agua clorada debe agregarse 0,1 ml de una solución al 3% de tiosulfato de sodio.

 Sino se analiza inmediatamente, en heladera hasta su revisión.

Actividad N° 2: Siembra de una muestra de agua para análisis bacteriológico

Las características microbiológicas que debe presentar el agua potable según la normativa del Código Alimentario Argentino son las siguientes:

• Bacterias aerobias mesófilas (BAM) < 500 UFC por ml

• Coliformes totales ≤ 3 NMP por 100 ml

• E. coli ausencia en 100 ml

• Pseudomonas aeruginosa ausencia en 100 ml

1. Recuento de bacterias aerobias mesófilas totales (BAM):

Sembrar 1 ml de las muestra de agua en una placa de Petri estéril, y agregar agar para recuento fundido ya que es en placa vertida). Incubar a 37°C durante 24 horas y se realizan los recuentos (UFC/ml).

Resultados

Muestra de agua de canilla: 680 UFC/ml

Muestra de agua de pozo: 196 UFC/ml

2. Recuento de bacterias coliformes totales (CT) y fecales o termotolerantes (CF o CTL):

La prueba para detectar coliformes totales consta de dos fases :la prueba presuntiva y la prueba confirmatoria. Con esta ultima prueba se realiza el recuento de coliformes fecales o termotolerantes (CF o CTt, respectivamente).

2.1 siembra e incubación

Prueba presuntiva: Se sembraron 10 ml de la muestra en 3 tubos con caldo laurilsulfato (CL) de doble concentración, 1 ml en tres tubos CL concentración simple y 0,1 ml en tres tubos con CL concentración simple. Se incubaron a 37°C durante 24/48 horas. La producción de turbidez y gas en los tubos evidencia la presencia de coliformes presuntivos (CP).

Siembra 0,1 ml 1 ml 10ml

Tubo pozo canilla pozo canilla pozo Canilla

1 + + + + + +

2 + + + + + +

3 - - - + + +

Los resultados de la prueba presuntiva fueron:

La muestra de agua de canilla: 3, 3, 2: 460 NMP

La muestra de agua de pozo: 3, 2, 2: 210 NMP.

Prueba confirmatoria: de cada tubo CL (prueba presuntiva) con resultado positivo, se transfirió una alícuota a un tubo con caldo lactosado verde brillante bilis (CLVBB). Se incubó a 37°C durante 48 horas. La producción de turbidez y gas en los tubos confirma la presencia de coliformes totales.

Los resultados de la prueba confirmatoria fueron:

Pozo Canilla

- 2 tubos positivos de 10 ml

-0 tubos positivos de 1 ml

-0 tubos positivos de 0,1 ml

NMP/100ml =9

-3 tubos positivos de 10 ml

-0 tubos positivos de 1 ml

-0 tubos positivos de 0,1 ml

NMP/100ml= 23

Recuento de coliformes fecales (CF): A las 48 horas de incubación de cada tubo CL con resultado positivo, se transfirió una alícuota a un tubo con caldo E-C triptófano. Se incubaron a 44,5 °C durante 24 horas. La producción de turbidez y gas en los tubos confirma la presencia de coliformes fecales (CF)

Los resultados de la prueba de recuento de coliformes fecales fueron:

Pozo Canilla

- 1 tubos positivos de10 ml

-0 tubos positivos de 1 ml

-0 tubos positivos de 0,1 ml

NMP/100ml = 4

-2 tubos positivos de 10 ml

-0 tubos positivos de 1 ml

- 0 tubos positivos de 0,1 ml

NMP/100ml =9

3. Identificación presuntiva de Escherichia coli: A los tubos positivos de caldo E-C triptófano se colocaron 4 gotas de reactivo de Kovac´s para revelar la presencia de Indol. La observación de un halo rojo en la superficie del caldo se considera reacción positiva y es indicativa de presencia presuntiva de Escherichia coli. Un resultado negativo se evidencia por un halo color naranja sobre la superficie del caldo.

Resultados:

Coliformes presuntivos:

Para la muestra de agua de canilla: negativo.

Para la muestra de agua de pozo: negativo.

4 Investigación de Pseudomonas aeruginosa: Se sembró una alícuota de 50 ml de la muestra en un frasco con caldo nutritivo de concentración doble. Se incubó a 37°C durante 48 horas. Luego, se realizó un repique con ansa en anillo en una placa con agar cetrimida y se incubó durante 24/48 horas a 37°C. Para confirmar la presencia de Pseudomonas se debe verificar la presencia de colonias con difusión de pigmentos verde-azulado en el medio y presencia de fluorescencia bajo lámpara de UV.

Resultados:

Para la muestra de agua de canilla: negativo.

Para la muestra de agua de pozo: negativo.

Conclusión:

En cuanto al recuento de bacterias aerobias mesofilas (BAM), se pudo observar que unas de las muestras poseía un número muy elevado (por encima del valor límite establecido por el CAA); mientras que la otra muestra se ajustaba a los parámetros establecidos por el CAA: BAM< 500 UFC/ml.

En cuento a los coliformes totales, ninguna de las muestras de agua pudo ajustarse a lo establecido por el CAA, que era un NMP de coliformes totales menor a igual a 3. Las muestras evaluadas presentaron NMP de 9 y 23.

Con respecto a la identificación de la presencia de Pseudomona aerugunosa ninguna de las muestras resulta positiva lo que indico una falta de contaminación en el proceso y una ausencia de crecimiento de este microrganismo en las instalaciones.

Con los resultados obtenidos se puede concluir que ninguna de las muestras resulto apta para el consumo humano ya que no cumplían con uno o varios de los parámetros fijados por el CAA.

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