Cromatografía En Papel Práctica

Introducción

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis ya que pese a no ser una técnica potente no requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel filtro.

La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. La separación se realiza en función de la afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles en agua se quedaran cerca del punto donde se aplico la muestra, y as menos solubles en agua y mas solubles en el disolvente llegaran más lejos. Las sustancias separadas se identificaran mediante diversos procedimientos físicos o químicos.

La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánicos cualitativos, permiten llevar a cabo la separación e identificación de iones, trabajando con cantidades mínimas de sustancia.

La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.

Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.

Los métodos colorimétricos de determinación de aminoácidos se basan en la reacción especí­fica de éstos con determinados compuestos, dando derivados coloreados. La formación de color se toma como resultado positivo e indica su presencia, mientras que el no desarrollo de color es indicativo de que no está presente.

Materiales y Métodos

• Tiras de papel filtro

• Apones con hendiduras

• Tubos de ensaye

• Gradilla

• Pipetas de kahn

• Tijeras

• Regla

• Par de guantes de látex

• Plumas

Reactivos (soluciones)

• Soluciones 0.1% de fenilalanina 0.002M(0.033g en 100mL de isopropanol al 10%) y acido aspaitico 0.002M (0.026 en 100mL de isopropanol al 10%)

• Mescla del solvente metanol-agua (95:5)

• Solución de ninhidrina al 0.2% disolver 0.2g de ninhidrina (hidrato de tricetlueno) en 95mL de butanol y añádase 5mL de acido acético al 10%

• Solución de butanol acido acético: agua 12:3:5 (v/v)

Reactivos

• Acido aspártico

• Felilalanina

• Tinta de las plumas

Método:

1. Se cortaron 3 tiras de papel filtro del largo del tubo de ensaye con un ancho de 1.5cm, y debajo de la tira se marcó una línea muy delgada.

2. En la parte media de la línea se aplicó un punto de la tinta de diferentes colores(amarillo, azul, verde) y se esperó a que se secaran, esto lo se hizo siempre usando guantes para no afectar el papel.

3. Se depositó en cada tubo de ensaye 2mL del solvente(metanol).

4. Se hizo lo mismo con las demás tiras de papel para después colgarla en un clip metálico en la parte contraria a la tinta, siendo sostenido por los tapones y se ajusto el tapón en el tubo de ensaye. La tira debió estar apenas en contacto con la mezcla

5. Después de 40 minutos solo se esperó a que subiera 2 o 3 cm antes del extremo superior.

6. Después

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