Practica Cromatografia

Cromatografía en capa delgada

Laboratorio de Química (Ing. Ambiental)

Martes 10 de junio de 2014

Rodríguez Laura & Rodríguez Sebastián

Resumen

La cromatografía en capa fina es un tipo de cromatografía de reparto en las que los componentes de una mezcla se separan por diferencia de solubilidad entre un sistema de disolventes. Los elementos del sistema cromatográfico son: fase estacionaria (sílica gel/albumina), y fase móvil (disolvente 1/disolvente 2). Es una técnica de realización simple respecto al equipamiento necesario para su desarrollo. El parámetro experimental asociado a la técnica es el Rf (coeficiente de reparto), relacionado con la solubilidad relativa de un compuesto en la fase estacionaria y fase móvil, y que depende de su estructura química y su hidrosolubilidad. Dentro de la presente práctica se llevara a cabo la separación de pigmentos de espinaca en solvente de éteres para identificar los diferentes gradientes, así como la separación de una mezcla de aminoácidos, que se revelaran e identificaran mediante la reacción con ninhidrina.

Palabras claves: aminoácidos, espinaca, fase estacionaria, fase móvil, separación de pigmentos.

Introducción

La cromatografía en capa delgada en una técnica usada en la separación de mezclas de dos o más compuestos donde están involucradas dos fases, móvil y estacionaria (Gennaro, 2000).

Para llevar a cabo cierta separación se tiene en cuenta el tipo de cromatografía a usar, el cual es usada la forma de cromatografía de adsorción sólido-líquido, donde la muestra se adiciona una placa rectangular(fase estacionaria) con ayuda de un capilar a 0,5 mm aproximadamente del extremo inferior. Dicha placa se introduce a un vaso de precipitado con una pequeña cantidad de solvente (fase móvil), se tapa y se deja ascender hasta 0,5 mm abajo del extremo superior. Los dos adsorbentes más utilizados son gel de sílice y alúmina, ambas de carácter polar, donde alúmina retiene con más fuerza a los compuestos apolares y el gel de sílice para retener compuestos polares (Dupont & Gokel).

Las moléculas se comportan de manera diferente respecto al solvente usado. Para determinar la rapidez con que se mueve el soluto se usa el Rf (Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida por el eluyente (Y)), el cual determina la relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen de la placa.

Esta técnica es usada principalmente para separar moléculas relativamente pequeñas, donde determina su composición, grado de afinidad y mostrar que la fase estacionaria tenderá a retener las sustancias en mayor o menor grado, la fase móvil asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor o menor avance de los componentes de la mezcla, según su polaridad (Harris, 2003). La práctica fue realizada con hojas de espinaca ya que con esta se logra ver los diferentes pigmentos fotosintéticos que son arrastrados por el solvente tales como la clorofila a y b, xantofila y carotenos.

Procedimiento

1. Cromatografía en capa delgada sobre sílica gel de pigmentos de la espinaca.

Se tomo una pequeña cantidad de espinaca previamente desecada la cual se deposito en un mortero de cerámica (Imagen 1) para ser triturada, una vez se obtuvo un polvo fino se agrego aproximadamente 5mL de éter de petróleo, se continuo con la maceración unos cuantos minutos para obtener el extracto de pigmentos (Imagen 2).

Contiguo a esto, se trazo una línea con un lápiz de punta roma a 0.5cm en cada uno de los extremos de la placa de sílica gel. Posteriormente, con un tubo capilar se aplico una gota del extracto obtenido en el paso anterior en tres puntos diferentes de una de las líneas, la cual se sumergió en la fase móvil de aproximadamente 15ml correspondiente a un solvente para elución de pigmentos: éter etílico: éter de petróleo (2:1) contenido en un erlenmeyer y se tapo con ayuda de un vidrio de reloj permitiendo que el solvente ascendiera (Imagen 3).

Una vez el solvente llego hasta la línea trazada a 0.5 cm de la parte superior, se retiro la placa, marcando en esta, el frente del solvente y encerrando con lápiz las manchas correspondientes por lo menos a un pigmento.

2. Cromatografía en capa delgada de una mezcla de aminoácidos sobre alúmina.

Se tomo con ayuda de un tubo capilar una gota de los extractos aminoácidos de Lisina y Propalina para ser aplicados en tres puntos diferentes (lisina, propalina, lisina, respectivamente) sobre una línea previamente marcada en una placa de alúmina a 1cm de uno de sus extremos.

Posteriormente,

...